主题:【第十一届原创】【前处理】我的孔雀石绿样品前处理经历

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weiqing
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    刚开始做动物源食品中孔雀石绿(LCMSMS法)样品前处理时一直发现空白有污染,然后就开始逐步排查原因,首先重新配置了流动相,接着冲洗管路,把所用的试剂,旋蒸瓶,进样小瓶,离心管,氮吹针,分液漏斗,针筒和滤膜以及用于样品标识的记号笔等一一做了排查,最后发现比较容易受到污染的是旋蒸瓶,离心管标识,氮吹针,分液漏斗等都有可能引入污染,所以在做孔雀石绿样品前处理时要特别注意防止污染的引入,现把前处理过程总结如下:



  • 未加工水产品(此过程可以和沙星,磺胺测定前处理合并,减少工作量):



1.称取5 g(精确至0.01g)制备好的试样,置于50mL塑料具塞离心管中,依次加入内标标准溶液,加入20mL提取液(2%甲酸乙腈)振荡提取2min,5000r/min离心3min,取上清液备用,残渣用20mL乙腈重复提取两次,合并上清液,45℃旋转蒸发(或氮吹)至近干,用流动相定容至5mL (若含油脂较多用乙腈饱和正己烷去油),混匀,过0.22 μm滤膜后,用LCMSMS分析。
(二)加工水产品:
称取5 g(精确至0.01g)制备好的试样,置于50mL塑料具塞离心管中,依次加入内标标准溶液,乙酸铵缓冲溶液,盐酸羟胺溶液,对-甲苯磺酸溶液,振摇后加入30mL乙腈,振摇2min,以5000 r/min离心3min,将上清液转移到250mL分液漏斗中,用30 mL 乙腈重复提取残渣一次,合并上清液。分液漏斗中加入50mL二氯甲烷,30mL水,振摇2min,静置分层(静止时间不超过10min),收集下层有机层于250mL 梨形瓶中,45℃旋转蒸发至近干。加入5mL 乙腈,漩涡振荡器,溶解残渣,转移至15ml离心管中。再加入5mL乙腈饱和的正己烷,涡旋30s后静置分层,弃去上层正己烷层。如有需要,重复上述操作。
将下层乙腈层直接过预先活化好的中性氧化铝串联阳离子交换柱,控制阳离子交换柱流速不超过0.6mL/min,再用2 mL乙腈淋洗中性氧化铝柱后,弃去中性氧化铝柱。依次用3 mL2%甲酸溶液、3 mL乙腈淋洗阳离子交换柱,弃去流出液。用4mL洗脱液洗脱,洗脱流速控制为1 mL/min,用10mL 刻度试管收集洗脱液,用稀释液定容至5mL,混匀,过0.22 μm滤膜过滤后用LCMSMS分析。
(三)质控:
1. 同时做方法空白和加标实验。方法空白<0.2μg/kg,仪器至多间隔10针进1针方法空白。
2. 标准曲线的回归系数大于等于0.995.
3. QC溶液的回收率应在80%-120%,仪器至多间隔10针进1针QC.
4. 样品加标试验的回收率在70%-130%。
5. 超过定量限的样品,进行双样定量分析, 相对百分比差值小于20%。
6. 同一批样品相同基质的至少选取一个样品做平行样。
(四)注意事项:
在样品前处理时候,要防止交叉污染。
1.在制样时,制样容器和萃取时所用分液漏斗等用无水乙醇再清洗一遍,晾干后使用。
2.盛放样品的容器或者自封袋不可用油性记号笔标识,每次制样完成后用无水乙醇把实验台面清洁一遍,防止后续样品交叉污染。
3.在前处理过程中离心管标识不能使用油性记号笔标识,容易造成污染,可以使用铅笔标识。
4.氮吹针清洗后用马弗炉450度烘2h后使用,或者用无水乙醇超声清洗三次后使用。

5.标品要避光,在加标时操作要尽量快,标准曲线从高浓度到底浓度依次配制,以防止低浓度标液暴露时间过长而检测不到进而影响定量的准确性。此外,进样器的温度也要设置在4-8℃,避光。且样品瓶用棕色的。
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2018/10/24 14:00:32 Last edit by v3237657 举报
Shy WONG
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前面复述标准,后面讲注意点,还不错!
weiqing
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原文由 Shy WONG(love418wh) 发表:
前面复述标准,后面讲注意点,还不错!
谢谢!个人经验,希望对小伙伴们有所帮助。
Insm_065b80f0
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检测老菜鸟
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炎发讨伐者
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正己烷是不是会吸附隐色孔雀石绿,没关系吗?我现在是最后吹干之后或者旋干之后复溶感觉隐色没有复溶出来,知道原因的麻烦告诉一声
rebma
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请问油性记号笔的影响是什么?请赐教?