主题:【第十一届原创】动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)的测定

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鹤壁农检联合队发表于:2018/10/31 06:49:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复
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10月三等奖
                                                              动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)的测定
色谱柱:菲罗门 kinetex C18柱(100×2.1mm 2.6um)
试剂溶液:  甲醇水(3+7):300 mL甲醇与700 mL去离子水混匀;
乙腈饱和正己烷:乙腈与正己烷等比例混合,取上层;
说明:下列所述标准工作液A、B为氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素混合标液
标准中间液:氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素1.0 μg/mL
内标中间液:D-CAP  1.0 μg/mL
标准工作液A(25 ng/mL):吸取1.0 μg/mL标准中间液0.25 mL用30%甲醇水定容至10 mL,混匀(该溶液临用现配);
内标工作液A(25 ng/mL):吸取1.0 μg/mL内标中间液0.25 mL用30%甲醇水定容至10 mL,混匀(该溶液临用现配);
标准工作液B(1 ng/mL):吸取标准工作液A 0.4 mL用30%甲醇水定容至10 mL,混匀 (临用现配)。
上机标准曲线:分别移取0、0.1、0.2、0.4、1.0mL标准工作液A(25 ng/mL),1.0mL内标工作液A(25 ng/mL)于5个10mL容量瓶中,30%甲醇水定容至刻度,得标液浓度为0、0.25、0.5、1.0、2.5 ng/mL,内标溶度为2.5ng/mL。
附:标准曲线配制:    外标中间液:氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素1.0 μg/mL

样品前处理:
准确称样5.00 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中,添加氯霉素内标,加入0.5mL氨水,加入5 g 无水Na2SO4和20 mL乙酸乙酯,用均质器以10000 r/min的速度均质1 min,15 mL乙酸乙酯清洗均质头,加盖振摇,3500 r/min离心5 min,上清液转移至150 mL的棕色梨形瓶中,在40 ℃减压旋转蒸发至干,加入2 mL甲醇水(3+7)和2 mL 乙腈饱和正己烷溶解洗脱,高速离心分层,取下清液,用0.2 μm微孔有机滤膜过滤,上机测试。

氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)的测定涉及标准汇总、比较见表1:

线性范围、线性方程
分别对氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准系列工作溶液进行测定,以标准溶液的浓度(ng/mL)与氘代氯霉素浓度的比值为横坐标,以标准溶液中被测组分峰面积与氘代氯霉素峰面积比为纵坐标,绘制标准曲线或计算回归方程,具体结果见表2。

氯霉素(0.25ng/mL)、甲砜霉素(2.5ng/mL)、氟苯尼考(氟甲砜霉素)(2.5ng/mL)MRM图:

鸡肉样品测定MRM图:

鸡肉样品加标氯霉素(0.25ng/mL)、甲砜霉素(2.5ng/mL)、氟苯尼考(氟甲砜霉素)(2.5ng/mL)MRM图:



鸡肉样品加标0.1ug/kg氯霉素提取定量子离子151.9的信噪比:

鸡肉样品加标1.0ug/kg甲砜霉素提取定量子离子184.9的信噪比:

鸡肉样品加标1.0ug/kg氟苯尼考提取定量子离子336.0的信噪比:

注意事项:
1、每批样品检测应包含:标液曲线、试剂空白、样品空白、样品加标、样品。
2、加标回收:分别添加1 ng/mL标准工作液B 0.5 mL于空白样品中,氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素相当于0.1 μg/kg水平;
3、负离子模式,上机前如响应不够需清洗离子源或增加仪器平衡时间
4、初测选适用基质的任一样品加标,如遇特殊基质(如饲料、血粉等粉末样品)称1.0 g,其余步骤同肉制品,定量下限与加标水平同时提高为氯霉素1.0 μg/kg,特殊基质应选用该样品做加标回收,复测时做平行样品,如初测浓度过高,复测时应加大曲线范围或者将样品稀释后上机,保证样品浓度在曲线范围内。
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最后一步骤如果浓度高,稀释后上机咱们做过吗,我们都是用增加标曲点来做,没有试过稀释,如果可以,下回也试试稀释
简爱
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问题123
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老师问您一下,最后的定容体积怎么计算,又有甲醇水和乙腈饱和正己烷。以2ml的甲醇水最终定容体积吗?
symmacros
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很详细的方法介绍,根据实际情况调整方法。
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原文由问题123(v2857333)发表:老师问您一下,最后的定容体积怎么计算,又有甲醇水和乙腈饱和正己烷。以2ml的甲醇水最终定容体积吗?
是的,因为上层是正己烷层啊
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原文由symmacros(jimzhu)发表:很详细的方法介绍,根据实际情况调整方法。
谢谢朱老师的夸奖
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原文由检测老菜鸟(v3295053)发表:最后一步骤如果浓度高,稀释后上机咱们做过吗,我们都是用增加标曲点来做,没有试过稀释,如果可以,下回也试试稀释
那你们的工作曲线有多少个点?
检测老菜鸟
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原文由 我是风儿(com.example.sj.xlf.forum.entity.ForumReplyItem$ReplyReferItem) 发表:null
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正常来说五个点,增加最多到七个
有一次我们的实验室外审检查员说现在工作曲线要有六个点,可是我们找不到来源出处