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液相色谱（LC）

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主题：【求助】标准品做线性过程中，出现宽峰，难分离双峰。

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有水有渝

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2018/12/7 15:53:13 11楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

能把进8uL的图发上来看一下吗，这个条件下你进10uL看看什么结果，如果也是不行说明柱子可能有点污染了，另外，试试上机溶液能不能用4%冰醋酸乙腈（52 48），另外你的这个方法哪是来的，整体接近2%的冰乙酸，酸度不会太低吗？

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m3169744

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2018/12/8 14:28:51 12楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

不是过载了，这是你的方法从根本上就走偏了。做标曲的时候很多人都会用同一浓度不同进样体积的方式来做，很简单，大部分时候还可以，但是这种方法从原理上讲是错误的方法，所以出现数据波动也是在所难免。
中国药典上写的清清楚楚，HPLC做标曲的时候应该是把样品稀释到不同浓度，按照统一进样体积进行分析，最终计算标曲。
为什么不同进样体积的方法是错误的？这是因为从根本上来讲，紫外检测器或者荧光检测器都是浓度型检测器，而不是质量型检测器。浓度型检测器的一个特点就是相应和物质的浓度成正比，而不是和物质的量成正比。如果不同体积下进样相同浓度，体积变大不大的情况下，色谱柱有浓缩作用，看似物质的量是成线性的。但是如果体积变大到一定程度，超过了色谱柱的浓缩能力，就会造成样品分散，最终造成检测器的响应值与实际进样量之间产生偏差。
所以不要用这种看似简单的偷懒方法，还是按照药典的要求认认真真的稀释样品才是正确的方法。

该帖子作者被版主 bingwang228加 2积分， 2经验，加分理由：经验分享

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m3116636

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2018/12/9 15:58:39 13楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 m3169744(m3169744) 发表:不是过载了，这是你的方法从根本上就走偏了。做标曲的时候很多人都会用同一浓度不同进样体积的方式来做，很简单，大部分时候还可以，但是这种方法从原理上讲是错误的方法，所以出现数据波动也是在所难免。中国药典上写的清清楚楚，HPLC做标曲的时候应该是把样品稀释到不同浓度，按照统一进样体积进行分析，最终计算标曲。为什么不同进样体积的方法是错误的？这是因为从根本上来讲，紫外检测器或者荧光检测器都是浓度型检测器，而不是质量型检测器。浓度型检测器的一个特点就是相应和物质的浓度成正比，而不是和物质的量成正比。如果不同体积下进样相同浓度，体积变大不大的情况下，色谱柱有浓缩作用，看似物质的量是成线性的。但是如果体积变大到一定程度，超过了色谱柱的浓缩能力，就会造成样品分散，最终造成检测器的响应值与实际进样量之间产生偏差。所以不要用这种看似简单的偷懒方法，还是按照药典的要求认认真真的稀释样品才是正确的方法。

以前还真不是特别了解情况，你这么一说清楚啦，谢谢普及知识，会按照标准做的?(?????)?

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