主题:【求助】3-氯-1,2-丙二醇标准曲线问题请教

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yjh_scau_2005
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最近在开展食品中3-氯-1,2-丙二醇方法摸索,在对标样进行衍生,并作标准曲线的时候发现有如下问题,请各位大神不吝指教。
1、选取5个点作为3-氯-1,2-丙二醇标准样品,质量分别为0.0286ug、0.143ug、0.286ug、0.572ug、1.144ug,在作标准曲线时,在每个标样中分别加入等量的D5-3-氯-1,2-丙二醇,其质量为0.222ug,上述标样中均加入正己烷定容至2mL,然后按标准要求加入40uL的七氟丁酰基咪唑进行衍生反应,后续的步骤严格按标准要求执行;
2、衍生结束后,上气质进行测定,这时候问题出现了,按照上述的内标加入量,D5-3-氯-1,2-丙二醇在各标样的中的量应该是相同的,按理论来说,其在谱图中的峰面积也应该是大致相同的,最起码不会有太大的差别,但实验结果却是内标的峰面积会随着标样浓度的增加而不断的增大,其具体的数值为38845、86170、185376、412975、887632;反观标样3-氯-1,2-丙二醇的峰面积,其实测值与标样浓度值对应增长,成线性关系,具体测定值分别为26801、64667、138047、300758、640761。如果按照外标作标准曲线的话,线性是没问题的,但如果按内标作曲线的话,作出来的曲线压根就没法使用,可以说完全不成线性,这就是我请请教各位同行的问题,你们在用内标作这个项目的时候也会遇到这个问题吗?如果没有,那么你们的内标面积都能保持一致吗?为了各直观的说明这个问题,我把我做的5个标准点谱图按浓度从低到高一并附上以作参考,其中前面的峰为内标,后面的峰为3-氯-1,2-丙二醇。
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牛一牛
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内标法的主要目的是消除进样误差干扰,内标法本质是看你对照和内标的比值,并不是单独分开考虑的,从你给描述貌似关注的并不是比值。
太匆匆
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D5的浓度是一样的,出来的峰面积也应是差不多的,你衍生后的体积是不是变小了,衍生用离心管的瓶盖一定要拧紧,防止正己烷挥发。
yjh_scau_2005
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原文由 牛一牛(v2700892) 发表:
内标法的主要目的是消除进样误差干扰,内标法本质是看你对照和内标的比值,并不是单独分开考虑的,从你给描述貌似关注的并不是比值。
我关注的就是比值,现在情况是标准系列峰面积越来越大,这符合预期,毕竟浓度越来越高,但内标加入量是一样的,理论上峰面积不应该也越来越大,按照目前情况比值做标准曲线,压根就不成线性的
yjh_scau_2005
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原文由 太匆匆(v2709557) 发表:
D5的浓度是一样的,出来的峰面积也应是差不多的,你衍生后的体积是不是变小了,衍生用离心管的瓶盖一定要拧紧,防止正己烷挥发。
反应前后的体积没有多大变化,正己烷也没有挥干,这点我做的时候还是很注意的。
yjh_scau_2005
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我现在的想法是衍生试剂七氟丁酰基咪唑可能失效了,毕竟这个试剂是放冰箱很久了,之前也是开封过了,明天打算重新买一瓶新的回来,再做一次标曲。就是不知道我这个情况之前有没有同行也遇到过,可多交流交流经验
太匆匆
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yjh_scau_2005
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原文由 太匆匆(v2709557) 发表:
加入的D5是同一个浓度吗?
是的,加入量一样的
binshengliang
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做过,没出现这种情况,就是回收率不好,看你内标都能成都是倍数增长,不知道是不是认错峰了?
yzguo
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dingshx
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