主题:【第十二届原创】水产品中孔雀石绿的能力验证实验

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我是风儿
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鹤壁农检联合队发表于:2019/08/11 17:11:29 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复
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                                                      水产品中孔雀石绿的能力验证实验
★检测方法标准:
标准1: GB/T 19857-2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》
标准2: SN/T 1768-2006 《水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的快速测定方法》  (2017.12.12废止)
★前处理方法不同之处:
国标方法:GB/T 19857-2005:
□鲜活水产品:提取:称取已捣碎的供试品5g(精确至0.01g), 置于50ml离心管中,添加同位素内标工作液,加入11ml乙腈,超声2min, 8000r/mim匀浆30s, 4000r/min离心5min,取上清液转移至25ml比色管中;另取一50ml离心管,加入11ml乙腈,洗涤涡匀浆刀头10s,洗涤液移入前一离心管中,用玻璃捣碎离心管中的沉淀,涡旋混匀器上振荡30s,超声波振荡5min,4000r/min离心5min,上清液合并至25ml比色管中,用乙腈定容至25ml,摇匀备用。                                                                                                                                                                                                        净化:移取5.00ml样品溶液加至已活化的中性氧化铝柱上,用4ml乙腈洗涤中性氧化铝柱,收集全部流出液,45 ℃  旋转蒸发至约1ml,残液用乙腈定容至1.00ml,超声振荡5min,加入1.0ml 5mmol/L乙酸铵,超声振荡1min,用0.22um滤膜滤过。(内标:2ng/ml, 0.5g样品/ml)
□加工水产品:
加了:2种提取试剂:盐酸羟胺、对甲苯磺酸,加:二氯甲烷提取2次,过:中性氧化铝小柱串接到阳离子交换柱, 柱子要先活化,控制流速不超过0.6ml/min,依次用3ml体积分数为2%的甲酸溶液、3ml乙腈淋洗阳离子交换柱,弃去流出液,用4ml体积分数为5%的乙酸铵甲醇溶液洗脱,洗脱流速为1ml/min,用水定容至10ml,样液经滤膜过滤。
最后:5g→ 10ml,即0.5g样品/ml
优点:比较干净
缺点:繁琐、回收率难保证

出入境检测方法:SN/T 1768-2006
      称取已捣碎的样品5.00g,置于50ml离心管中,加入前处理试剂盒中的提取剂1(液体20.0ml),用匀浆机8000r/min均质30s,再加入提取剂2(固体粉末),振荡1min, 4000r/min离心5min,取上清液10.0ml于鸡心瓶中,再加入异丙醇10ml,50℃~55℃水浴旋转蒸干,残留物用2.5ml流动相(乙腈+5mmol/L乙酸铵75+25,V/V)溶解,溶解液放入2.5ml离心管中,8000r/min离心5min后,滤膜过滤。
最后:5g→20ml提取,取其中10ml,浓缩定容至2.5ml,即: 1g样品/ml
优点:前处理相对简单、回收率高。
缺点:油脂可能处理不完全,要买专用试剂

特别:不能采用这些措施:冷冻除脂、除杂质、当天如果没前处理好、不能冷冻保存;
结果1:冷冻分层
结果2:隐色孔雀石绿及氘代、隐色结晶紫及氘代(100ng/ml)的响应值均下降到50%;
买专用试剂时,有提到检测加工水产品时,过离子交换柱小柱。
经过比较,按出入境检测方法:SN/T 1768-2006进行前处理

注意:杂峰延迟出现的拖尾峰,杂峰?目标峰?


      混标提取子离子色谱图:各10ng/ml





总结:
用出入境检测方法:SN/T 1768-2006试剂盒法进行前处理,结果重现性理想,特别注意:不能采用这些措施:冷冻除脂、除杂质、当天如果没前处理好、不能冷冻保存
该帖子作者被版主 avih198110积分, 2经验,加分理由:鼓励原创
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zyl3367898
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s/n1768不是废止了吗?有没有新标准出来?看起来前处理比较简单,要买专门的试剂盒吗?
zal
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nicexxh
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Insm_e5ea6d7b
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赞美辛勤的劳动者,吧。有方法对比、,而且总结了优缺点,甚好、甚好
Insm_e5ea6d7b
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五年以前,我曾经想用液相色谱仪做这个四种项目,由于各种原因没有做。现在看到这个篇原创,非常欣赏
射手的欲望
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内径3mm,填料2.6微米的K柱只走0.25的流速?目标峰9min出完峰了需要十几分钟平衡?一针差不多半小时。有内标孔雀石绿竟然不成线性,结晶紫外标不成线性,请问怎么定量?线性没必要做那么多点吧,跨度太大,低浓度点几乎没用。
avih1981
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我也正在练习孔雀石绿,用的是GB20361-2006
zyl3367898
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那个拖尾峰如何优化掉的,调节了什么?流动相有何改变?
avih1981
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楼主有不有做过液相方法的前处理?有什么经验吗?