摘要：一般现在液相检测通常有面积归一法、校正面积归一法、外标法、内标法等几种方法，而检测纯物质，一般只采用面积归一法，
而在确定杂质并提取到杂质对照品或提取到主成分对照品时，也可采用加校正因子或不加校正因子的主成分自身对照法进行检测。
但是在实际检测过程中，有时候会出现波长确定比较难的情况，本文就如何在使用面积归一法时确定波长并且在主成分波长和杂质波长不同时如何进行选择提出可行性方案。
在使用液相进行检测一种物质的时候，如果没有标准方法、文献可供参考，我们需要通过以下几种方法进行判定波长，
第一种是使用DAD二极管阵列检测器，可以很方便的确定被测组分，包括主成分和相关物质的最大吸收波长或者特征波长；
第二种是通过紫外可见分光光度计进行波长的扫描，也能得到被测主成分的最大吸收波长或者特征波长，但是无法判定相关杂质的最大吸收波长，
而且液相并不一定使用的是最大吸收波长，还可能从分离度等方面进行考虑。
第三种是液相紫外检测器有波长扫描功能的，通过扫描波长进行确定目标组分的吸收波长，缺点仍然是只能一个波长测试一遍，
才能进行分离度等其他参数的考察。
一般面积归一法测试进行选择波长的过程中，优先选择被测组分的最大吸收波长，其次是特征波长，
并且要确定流动相在该波长的吸收不对被测成分产生干扰，选择波长最好比溶剂波长高20nm左右，这样干扰就比较小。
但是单从面积归一化法这一个检测方法进行考虑，它是无法判断样品中相应成分的准确含量的。
如果合成的相关化合物结构比较类似，都有紫外吸收，其紫外吸收曲线比较一致，有一定的参考价值。
但一般情况下，其可靠性是很差的。但是，对于纯物质的判定，往往不能通过外标和内标法进行测定，而是采用面积归一法结合其他方法进行测定。
如果出现纯物质的检测，主成分和相关杂质的在一个波长上响应不同，
例如：该样品主成分在213和261nm处有两个吸收峰，213nm处为最大吸收峰。213nm测得的纯度较261nm低2%左右，杂质的出峰情况不同。紫外谱图如下：
红色为213nm谱图，黑色为261nm谱图

我们首先可以对主成分及主要杂质进行质谱分析，确定其化学式及其化学性质，
如果有该杂质的对照品或者该杂质能够被提取出来，我们可以做杂质与主成分的校正因子，
那么在某个波长下，该杂质的相对于主成分的校正因子满足0.8-1.2的范围内，我们就可以确认这个波长是适合的。
如果遇到比较难提取的杂质，但是主成分有相应的对照品，也可以在不同波长下进行主成分对照法进行，
配制对照溶液并调节仪器灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，
并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。通过不同波长下面积归一法与主成分对照法测试的杂质含量的比值进行确定最佳检测波长。
如果主成分也没有相应的对照品，这时可以采用衍生化法，不过这种方法仍需了解主成分及相关杂质的化学性质等，
然后采用合适的衍生剂，将主要杂质和主成分用衍生的手段把吸收波长调整至非常接近，然后采用相同波长进行检测。
这种需要的专业知识较高，而且衍生化法在实际应用中也存在衍生剂干扰、衍生不完全等情况。
还有一种方法是在通过NMR的氢谱、碳谱等相关的谱图先基本确定样品很纯的情况下，通过于其他检测器或者检测方法进行比对，
比如我们可以通过卡尔费休法检测水分、顶空色谱检测残留溶剂、灼烧测定灰分、离子色谱测定一些小分子有机酸，
然后结合紫外分光光度计、化学滴定等方法进行主成分的检测，并且与其在液相色谱上的各相关波长结果进行比对，即可得出仪器检测的最佳波长。
综上所述，面积归一法并不能只看一个波长的结果，为了得到可靠的结果，
我们需要综合判定其在不同波长下的结果进行比对，并根据主成分和杂质的波长响应，得到最佳检测波长，
有条件的情况下，还需要通过其他检测器和检测方法进行比较。