主题:【第十二届原创】如何解决液质异常出峰实例

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如何解决液质异常出峰实例

液质利用在摸索方法时尽可能会缩短时间,以保证色谱峰更好的重现性和稳定性。而在追求短时间高效率的色谱方法时,难免出现各种“鬼峰”的出现。那么当出现异常色谱峰时该如何处理应对呢?今天我们为大家以实际例子分享正确的处理过程和检查步骤。

我们今天分析的样品是糖类物质,其选用的色谱柱为资生堂PC HILIC柱,而其资生堂色谱柱与飞诺美HILIC色谱柱的使用比较我也写了一篇分享。一周前开发的方法,目标物稳定在2.5分钟出峰,而本周重新接上色谱柱却发现第一针如下图:色谱峰依然在2.5 分钟出峰,有些离子对峰形较差,可删掉因为我们针对每一个分析物都设置了3对离子对。此时初始流动相10%水。

而当我们进第二针、第三、第四针却发现此时在1分钟出现异常峰。如下图。此时1分钟的色谱峰和2.5分钟的色谱峰峰高相加几乎等于第一针2.5分钟的色谱峰峰高。那么问题来了,为什么会在1分钟出现鬼峰呢?

我们开始逐一排查鬼峰出现的原因:

首先怀疑是否存在柱前污染,导致此种现象发生。那么检验方法就是进一针空白样品,在保证空白样品没有被污染的前提下,我们发现结果并没有在1分钟出峰。那么柱前污染的因素被排除了。

第二我们怀疑是流动相中的高盐析出,导致ph变化,从而对分析物的存在状态产生了影响。那么我们抓紧将流动相取下超声,在保证没有发现底部盐粒的情况下,充分purge色谱泵,充分平衡色谱柱,进样。结果却依然不尽人意,1分钟仍然出峰。

第三此时我们回忆起上周末重新配置的乙酸铵浓溶液,不会是配置盐的母液时计算出现了问题?我们抓紧重新配置盐的母液。在保证流动相中没有发现底部盐粒的情况下,充分purge色谱泵,充分平衡色谱柱,进样。结果却依然不尽人意,1分钟仍然出峰。

第四,那么色谱泵和流动相都不存在问题,那是在色谱柱中出现的问题了。此时我们仔细观察压力变化。此时流动相梯度:0-1.5min,10%水相;1.5-1.6min,10-60%水相;1.6-3.5min,60%水相;3.5-3.6min,60-10%水相;3.6-6min,10%水相。正常色谱泵的压力应为初始1200psi,随着水相的增加,压力增高,后随着水相减小,压力也减小。但我们此时发现在6分钟时,压力仍居高不下,那么为什么只有在进样针移出时压力才会降低呢?

原因就在于虽然我们设置的是0.1分钟迅速将流动相由60%水相减少为10%水相,但色谱泵需要一个缓冲的过程,这个过程不会按照设定的0.1分钟而进行。即使安捷伦的色谱泵出现这种情况,那么其他厂家的色谱泵我认为也有类似情况。那么问题找到了,我们将分析时间延长至7.5分钟。同时也改变了初试流动相为5%水相,将色谱峰时间维持在中间时间。色谱峰稳定在2.5分钟出峰。如下图。问题迎刃而解。

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symmacros
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不错的色谱出出异常峰的原因排除,比较仔细,逐步排除。
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原文由 symmacros(jimzhu) 发表:不错的色谱出出异常峰的原因排除,比较仔细,逐步排除。
谢谢指导
phylixal
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仪器的dwell time 是多长呢?所以问题就是色谱柱没平衡充分?
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原文由 phylixal(v2830709) 发表:仪器的dwell time 是多长呢?所以问题就是色谱柱没平衡充分?
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phylixal
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原文由 歪果仁zZ(v3255306) 发表:
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啥?我问梯度延迟体积(或者说延迟时间)。https://www.waters.com/webassets/cms/library/docs/720005723en.pdf

假设你用的是1290二元泵,仅泵模块的系统延迟体积为170微升(姑且先不算进样器和柱前管路),你说延迟时间是0.1second,那么流速为1700 uL/s,折合102 mL/min。你这是制备色谱吗?
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原文由 phylixal(v2830709) 发表: 啥?我问梯度延迟体积(或者说延迟时间)。https://www.waters.com/webassets/cms/library/docs/720005723en.pdf假设你用的是1290二元泵,仅泵模块的系统延迟体积为170微升(姑且先不算进样器和柱前管路),你说延迟时间是0.1second,那么流速为1700 uL/s,折合102 mL/min。你这是制备色谱吗?
我以为您问的是质谱参数,不好意思,我不知道液相还有dwell time