主题:【原创】趣谈凝胶渗透色谱GPC/SEC – 检测篇之番外II之分子尺寸表征Rh和Rg

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p3200617
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正如之前谈到的高分子的结构尺寸的表征手段,可以通过光散射检测器得到分子的均方旋转半径Rg,也可以通过粘度检测器得到分子的流体力学半径RhRgRh具有不同的概念,其比值ρ=Rg/Rh可以反应分子的密度,即分子密度越大ρ值越小。



粘度检测器得到的特性粘度IV代表了高分子密度的倒数,可以利用如下公式得到Rh的大小



Rh的范围可以<1nm – 色谱分离上限。

光散射检测器检测大分子时散射光出现不均匀散射,通过Zimm外推的斜率,可以得到Rg的大小。



Rg的检测范围是从分子产生不均匀散射,即分子大于10-12nm–色谱分离上限。

下图为一个宽分布高分子的流出曲线,及其对应的RgRhMw可以看出,Rh可以在全部分子量范围内得到分子大小,而Rg只能够得到高分子量,即分子大于10nm,分子量超过~15万的线性分子的大小及结构特征。



Rg的检测目的通常涉及到一些高分子的理论模型及其计算,而Rh的检测则兼顾理论计算及其实际应用。对于生物高分子,尤其是蛋白质、单克隆抗体检测而言,由于其结构趋近于实心球结构,Rh更接近于其实际尺寸,而且由于通常其体积较小,散射光为均匀散射,则根本无法通过光散射检测器得到Rg
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2019/11/29 10:52:17 Last edit by p3200617 举报
小不董
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光散射可以较好的测定出Rg,粘度检测器可以较好的检测出Rh,如果再有浓度检测器,就可以更好得分析高分子的状态了。
有说法是光散射检测测定其分子量,柱效不是很重要,分离是否好,对其影响不大,是这样的吗?