主题:【求助】液相色谱,同一样品连续进两针,峰面积差距很大

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dadgoh
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原文由 淹死的鱼??(Insm_b8558831) 发表:首先,我有好几个疑点想和楼主探讨一下。你说你的前后方法改变了,还是在这台仪器上做出的数据吧?当时也是你所谓的自动进样器坏了还是,你自动进样器岛津哪一款,什么型号,你所说的重现性不良,能不能给出谱图,这样可以比较进样前后压力变化以及两次保留时间是否有差异,是否在允许范围内。若保留时间基本一致,则可以排除泵系统以及柱温箱和室温前后差异导致的重现性不良问题。那么问题只有考虑到进样模块了,根据你的描述,自动进样器有点像单次进样模式了,我不知道啥原因?之前肯定是正常的吧,是PC还是系统控制器的问题。岛津的自动进样器为了加快进样效率以及交叉污染,采用两个六通阀进行流路切换,分别为高压阀和低压阀有内外两个流路。请仔细观察是否能执行洗针、吸样、清洗针外部、进样、计量泵清洗等动作。我不明白你为啥要用甲醇清洗2.5min还要等平衡后再进样,不管处于LOAD位置还是INJECT位置,色谱柱都有流动相流通,只是处于待进样位置、泄压、内外流路接通时压力会有少许变化,但会马上恢复到压力稳定状态。所以你的平衡是什么操作?还有你说第一次都比第二次面积大,那么有没有试试同等条件下第三针、第四针是个啥情况。一般自动进样器模块出现重现性不良问题不是堵塞就是漏液,对于岛津来说,流路比较复杂,一步有问题,重现性就肯定不好。
实在不好意思,我才接触液相,是个小白,就是我们岛津的液相自动进样器坏了,之前就不能自动进样了,我当时用的水中的生物胺测试方法跑的,平行性是可以的,但是这个月又用食品中的生物胺液相方法测定,峰面积差距很大,举个例子,手边没图,第一针800多万,第二针就600多万了,因为时间比较长,我也没有多跑几针!自动进样器坏了那就没办法自动清洗针了,老师就让我们放一个甲醇,跑完一针洗一次,每跑五针换一个新的甲醇进样瓶。样品进样前,我们会用我们的流动相平衡30分钟,一般是到970psi. 等到跑完样品结束,压力就是500多psi. 然后进一针甲醇冲洗针,这时压力还是500多,洗2.5分钟,我们就停止,然后流动相跑,去平衡压力到970多psi,平衡好再进下针样品,我给你看一下我们的流动相梯度,应该是跑37分钟,我们设的32.01就结束了,不知道与这个有关系吗,仪器每个模块的型号我私发给您了,请您看看(不知道为啥,图片一发多,就不清楚)
淹死的鱼??
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“样品进样前,我们会用我们的流动相平衡30分钟,一般是到970psi. 等到跑完样品结束,压力就是500多psi. 然后进一针甲醇冲洗针,这时压力还是500多,洗2.5分钟,我们就停止,然后流动相跑,去平衡压力到970多psi,平衡好再进下针样品 ”按你这样描述,我大概算了一下进样前后压力波动在3Mpa也就是30bar左右,这都成啥了。那你有没有观察刚完成进样动作,你用甲醇手动清洗进样针时压力是多少?是一下子就下降了很多吗?你的梯度方法验证太慢了,你找一个等度十分钟左右出峰的样品试一下,看前后谱图保留时间一致不,然后多走几针,看看面积差异有多大?RSD符合不符合规定,这样就能很快的判断出来到底是不是仪器存在问题。还有你走梯度方法,按照条件肯定要全部走完啊,后面的都是平衡色谱柱的,不走完会影响到下一个样品的测定。一般清洗液建议50%甲醇最为合理,偏有机相和水相。
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原文由 淹死的鱼??(Insm_b8558831) 发表:“样品进样前,我们会用我们的流动相平衡30分钟,一般是到970psi. 等到跑完样品结束,压力就是500多psi. 然后进一针甲醇冲洗针,这时压力还是500多,洗2.5分钟,我们就停止,然后流动相跑,去平衡压力到970多psi,平衡好再进下针样品 ”按你这样描述,我大概算了一下进样前后压力波动在3Mpa也就是30bar左右,这都成啥了。那你有没有观察刚完成进样动作,你用甲醇手动清洗进样针时压力是多少?是一下子就下降了很多吗?你的梯度方法验证太慢了,你找一个等度十分钟左右出峰的样品试一下,看前后谱图保留时间一致不,然后多走几针,看看面积差异有多大?RSD符合不符合规定,这样就能很快的判断出来到底是不是仪器存在问题。还有你走梯度方法,按照条件肯定要全部走完啊,后面的都是平衡色谱柱的,不走完会影响到下一个样品的测定。一般清洗液建议50%甲醇最为合理,偏有机相和水相。
我们进甲醇清洗液的时候就跟进样品一样的操作,只是跑2.5分钟,进甲醇时压力就是直接到500多psi. 跑完甲醇后,平衡时,就慢慢上升到970多
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原文由 淹死的鱼??(Insm_b8558831) 发表:“样品进样前,我们会用我们的流动相平衡30分钟,一般是到970psi. 等到跑完样品结束,压力就是500多psi. 然后进一针甲醇冲洗针,这时压力还是500多,洗2.5分钟,我们就停止,然后流动相跑,去平衡压力到970多psi,平衡好再进下针样品 ”按你这样描述,我大概算了一下进样前后压力波动在3Mpa也就是30bar左右,这都成啥了。那你有没有观察刚完成进样动作,你用甲醇手动清洗进样针时压力是多少?是一下子就下降了很多吗?你的梯度方法验证太慢了,你找一个等度十分钟左右出峰的样品试一下,看前后谱图保留时间一致不,然后多走几针,看看面积差异有多大?RSD符合不符合规定,这样就能很快的判断出来到底是不是仪器存在问题。还有你走梯度方法,按照条件肯定要全部走完啊,后面的都是平衡色谱柱的,不走完会影响到下一个样品的测定。一般清洗液建议50%甲醇最为合理,偏有机相和水相。
而且每次的样品峰图都是一样的峰型和个数,没啥差异,就是同一个样品我的目标峰两针面积差太大
dadgoh
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原文由 dadgoh(dadgoh) 发表:也有可能与洗针溶液不合适有关,
洗针溶液应该是什么样的,用甲醇洗不可以吗
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原文由 Insp_b1631cb7(Insp_b1631cb7) 发表:洗针溶液应该是什么样的,用甲醇洗不可以吗
多数情况下,纯甲醇洗没问题,但有时只用甲醇未必能洗得干净。可用流动相逐渐增加甲醇比例试试。看两针的重复性是否改善。
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原文由 dadgoh(dadgoh) 发表:多数情况下,纯甲醇洗没问题,但有时只用甲醇未必能洗得干净。可用流动相逐渐增加甲醇比例试试。看两针的重复性是否改善。
亲你看看我的流动相,我要用哪个流动相加点甲醇呢,或者我直接用纯乙腈可以吗
dadgoh
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