主题:【第十三届原创】GB 5009.185-2016 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定标准解读

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鹤壁农检联合队发表于:2020/06/01 05:55:26 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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GB 5009.185-2016 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定标准解读

包含方法的原理、试剂、仪器、分析步骤、结果表述等主要技术内容。适用于食品(果汁饮料、果酒、果酱、果干及薯类制品等)中展青霉素的测定和确证。

(一)原理

澄清液体样品(果酒样品需去乙醇)直接固相萃取净化;混浊液体样品和固体样品先用果胶酶水解,再以乙酸乙酯提取,吹干浓缩后固相萃取净化,液相色谱-质谱/质谱法测定,外标法定量。

(二)试剂及仪器

液相色谱仪:Agilent 1200-6410 LC/MS色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3 1.8μm  温:30 ℃;进样量:10 μL;流速:0.2mL/min;流动相:A:纯水 B甲醇 梯度洗脱;

Iron Source: ESI-Capillary: 4 kVFragmentor:135Delta EMV: 300Gas Temp: 350 Gas Flow: 11 L/hrNebulizer: 35 psi


阴离子交换柱:Thermo HyperSep Retain-AX固相萃取柱,3mL/60mg;

上机工作液(临用现配)移取5.0 mL1.0 μg/mL展青霉素标准溶液至10 mL容量瓶中,用pH4.0水定容,混匀,浓度为0.5μg/mL

(三)分析步骤

取混合均匀的样品4.0 g,加50 μL果胶酶,4 mL水混匀,在40℃下酶解2 h,放置室温后,20 mL乙酸乙酯,涡旋提取1 min,于4000 r/min离心5 min,取上清液至鸡心瓶中,40℃旋转蒸干,pH4.03 mL洗脱(清汁样品不需要酶解、提取,直接过柱),过阴离子交换柱(使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化),2 mL 5mmol/L乙酸铵溶液、1 mL水淋洗,抽干;弃去淋洗液;2 mL甲醇洗脱,收集洗脱液于氮吹管中,加1滴冰乙酸,40℃氮气吹干,2 mL pH4.0水定容洗脱,过水系滤膜,上机测试。

说明

1、 展青霉素在碱性条件下不稳定

2、GB 5009.185-2016果胶酶(液体):活性≥1500U/g。

3、展青霉素在反相C18柱上保留较弱,检测时将色谱柱改为对极性化合物保留更强的HSS T3 1.8μm柱。

4、对饮料清汁样品的前处理,采用直接固相萃取净化法,方法简单、安全、可操作性强、结果可靠。

饮料混汁和果酱这样的试样,需要先将样品中的果胶累物质以果胶酶水解,以便于展青霉素能充分的被提取,经过实验发现,采用室温酶解果胶、乙酸乙酯萃取即可将展青霉素充分提取出,此前处理方法操作简单、安全、结果可靠。

果干这类固体试样的试样,需要通过充分均质粉碎才能保证结果的可靠性,经过实验发现,果干类试样要粉碎粉状,用水充分浸泡后才能保证果胶酶能充分接触细胞壁这类的果胶物质,保证展青霉素完全释放出来,从而保证结果的准确性和重现性。





检测展青霉素时须注意以下几个方面:


1、 展青霉素在碱性条件下不稳定

2、GB 5009.185-2016果胶酶(液体):活性≥1500U/g。

3、展青霉素在反相C18柱上保留较弱,检测时将色谱柱改为对极性化合物保留更强的HSS T3 1.8μm柱。

4、对饮料清汁样品的前处理,采用直接固相萃取净化法,方法简单、安全、可操作性强、结果可靠。

饮料混汁和果酱这样的试样,需要先将样品中的果胶累物质以果胶酶水解,以便于展青霉素能充分的被提取,经过实验发现,采用室温酶解果胶、乙酸乙酯萃取即可将展青霉素充分提取出,此前处理方法操作简单、安全、结果可靠。

果干这类固体试样的试样,需要通过充分均质粉碎才能保证结果的可靠性,经过实验发现,果干类试样要粉碎粉状,用水充分浸泡后才能保证果胶酶能充分接触细胞壁这类的果胶物质,保证展青霉素完全释放出来,从而保证结果的准确性和重现性。
该帖子作者被版主 avih198110积分, 2经验,加分理由:鼓励原创
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Last edit by p3299836 举报
zyl3367898
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中间灰色的部分是图片还是什么格式,与文字照的很齐。试验做的好,文字也很整齐,看着很舒服。
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用3个不同的固相萃取小柱来做试验,确定最佳的小柱,试验很完整。
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样品是果汁吗?盲样考试时总是用果汁。
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2020/7/1 22:05:37 Last edit by zyl3367898
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avih1981
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图文并茂,实验完整,注意事项祥细,学习了
zyl3367898
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方法验证的内容都齐全了,以后做方法验证时也这样做。