主题:【第十三届原创】三招教你轻松应对色谱峰拖尾

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三招教你轻松应对色谱峰拖尾

色谱峰拖尾不可怕,可怕的是积分时影响我们的分析结果准确度。相信每一个分析工作者都遇见过色谱峰拖尾的现象。顾名思义,当色谱峰呈现前沿陡峭、后沿较前沿平缓的不对称峰时,令人苦恼的拖尾峰就出现了。

图1 是拖尾较轻的一个色谱峰,当1.2分钟时,色谱峰开始出现,在1.25分钟达峰,即色谱峰前沿在0.05分钟内,而一直到1.5分钟此色谱峰依然有响应,色谱峰后沿已经长达0.25分钟,这就是典型的色谱峰拖尾现象。即左半边峰宽小于右半边峰宽。

分析领域一般用美国药典中的拖尾因子来评价色谱峰的拖尾情况,也可用对称因子来表示。拖尾因子=(5%峰高处的左右半峰宽之和)/二倍的5%峰高处的左半峰宽。对称因子=10%峰高处的左右半峰宽之比。在实际比较两种标准后,我们发现当拖尾因子和对称因子小于2时,两个标准得到的数值非常接近。

这种现象发生后,积分后的色谱峰取考察方法学一般很难通过。因此我们需要想办法解决色谱峰拖尾,在方法学考察前将色谱条件优化至最佳,这样后续工作才会顺利开展。下面我为大家分享一下色谱峰拖尾的机制,了解了机制和原因,那么我们会提高应对色谱峰拖尾的认识。



图1 典型色谱峰拖尾图



影响色谱峰拖尾的第一因素是硅胶表面存在大量各种形态的硅羟基,如自由硅羟基、螯合硅羟基和聚合硅羟基等。样品在分离过程中不仅与固定相C18发生作用,还与硅胶表明的硅羟基作用,最终形成拖尾。改善这种色谱峰拖尾需要更换色谱柱,最新的色谱柱可实现无金属离子环境下制造,可生产出高纯度的硅胶载体。此时可在流动相中添加盐,如三乙胺、乙酸铵等。

第二,如果分析者在使用色谱柱的过程中将色谱柱置于高温、强酸或一些极端使用方法时,会使固定相流失严重,导致自由硅羟基越来越多,进而色谱峰拖尾。因此在色谱柱日常使用过程中,需要尽可能减少使用极端操作方法。

第三,拖尾峰的出现可能是因为柱前柱后的死体积较多,导致样品在死体积发生了滞留和扩散。这个情况我是深有体会,有时自己怎么优化条件,色谱峰就是不对称,总是有拖尾的现象发生。而此时如果将柱前柱后的螺栓重新上紧,色谱峰极有可能会达到我们的理想状态。

今天的分享到此结束,感谢仪器信息网提供原创大赛平台让大家互相学习!
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