主题:【第十三届原创】GB 5009.97-2016第三法液质法检测酒类产品中的甜蜜素

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鹤壁农检联合队发表于:2020/06/01 20:35:50 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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                      GB 5009.97-2016第三法液质法检测酒类产品中的甜蜜素

色谱柱:菲罗门 kinetex C18柱(100×2.1mm 2.6um

流速:0.30 mL/min;柱温:30℃;进样量:10 μL

流动相A0.1%甲酸含6%乙腈;流动相B:甲醇    梯度洗脱

Time(min)

0.0

2.0

2.1

3.1

6.0

B%

5.0

5.0

60.0

5.0

5.0





检测方式:MRM多反应监测

Ion Source Type:  H-ESI

Positive Ion (V):  4000

Negative Ion (V):  3200

Sheath Gas (Arb):  40

Aux Gas (Arb):  10

Sweep Gas (Arb):  0

Ion Transfer Tube Temp (°C):  350


Vaporizer Temp (°C):  300

Default Charge State:  1

Cycle Time (sec):  0.4

Q1 Resolution (FWHM):  0.7

Q3 Resolution (FWHM):  1.2

CID Gas (mTorr):  1.5

Source Fragmentation:  10

Compound

Polarity

Precursor (m/z)

Product (m/z)

Collision Energy (V)

RF Lens (V)

TMS+

Positive

202

122

7.82

72

tms-

Negative

178

79.8

25.6

136



分别对加标阴性样品进行测定,以标准溶液的保留时间(min)为横坐标,被测组分的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。具体结果如下

     



    样品前处理:称取酒样10.0g,置于50mL烧杯中,于60℃水浴上加热30min,残渣全部转移至100mL容量瓶中,用水定容并摇匀,经0.22μm 水相微孔滤膜过滤后备用。

5.方法的回收率、精密度

5.1方法的回收率、精密度实验

分别向不含待测物的葡萄酒、白酒空白基质中添加甜蜜素标准溶液, 添加0.030.101.0 mg/kg三种浓度水平, 每个水平平行测定6, 平均加标回收率和相对标准偏差结果见表3。结果表明, 本方法平均加标回收率为74.6%~103.6%, 相对标准偏差(RSD)1.6%~5.2%

3 样品加标回收率与方法精密度实验


样品本底值(mg/kg

加标量(mg/kg

回收率(%

平均回收率

%

RSD

%

白酒(0.0058

0.03

79.6

76.2

69.1

77.7

72.4

72.8

74.6

5.2

0.10

78.7

77.2

76.9

79.1

75.9

79.1

77.8

1.7

1.00

85.2

86.5

86.4

85.9

86.4

81.8

85.4

2.1

葡萄酒0.0045

0.03

95.0

101.6

102.4

104.3

106.0

108.5

102.9

4.5

0.10

93.5

95.2

93.3

99.5

94.2

92.4

94.7

2.7

1.00

101.0

102.0

104.3

104.1

104.9

105.2

103.6

1.6



5.2 仪器的精密度实验

0.10 ug/mL甜蜜素标准溶液按照前述仪器条件重复做6次平行测定,结果见表4

                表4 仪器精密度
甜蜜素ug/mL

进样量uL

峰面积

峰面积均值

RSD

%

0.10

10.0

101.0

102.0

104.3

104.1

104.9

105.2

103.6

1.6



6. 仪器的检出限

葡萄酒空白基质中添加甜蜜素0.03 mg/kg浓度水平,按标准方法处理注入液相色谱-串联质谱仪中,测定信噪比,S/N10.0实验结果符合标准要求,见表5.

            表5检出限实验结果

名称

上机液浓度

信噪比S/N

甜蜜素 0.03 mg/kg

3.0 ng/mL

166


结论:1、标液要用空白基质的酒样来配制标准曲线,不可以直接用水来配制工作曲线,因为酒样是比较复杂的发酵产物,有的其酒体会对甜蜜素产生基质增强的效应,而使得定量不准确。

2、如果采用基质配标准曲线的话,则液质仪分析时,要将前面的3分钟的液体弃去废液里,否则酒样的香气物质进行质谱仪检测时,会使基线抬头,而使得低浓度的甜蜜素的信号被基质给覆盖了而检测不到。

                                         

                                                                                  将前面的3分钟的液体弃去废液酒样基质加标10ng/mLMRM图

                                                       

                                                                    样液全部进入质谱端的酒样基质加标10ng/mLMRM图

从图中可以明显地看到:基线的抬高使得10ng/mL的甜蜜素根本无法识别清楚。
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老师,您最后两个图79和96两个离子及122和170两个离子是正负粒子模式对比吗?正离子模式的产物离子122和负离子模式产物离子79。剩下的两个两个例子是作为什么对比的,有什么讲究吗?对于标准中有正负离子两种模式的方法,在定量分析时如果在正离子模式下有检出,还用负离子模式再进行定量分析吗?
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原文由 问题123(v2857333) 发表:
老师,您最后两个图79和96两个离子及122和170两个离子是正负粒子模式对比吗?正离子模式的产物离子122和负离子模式产物离子79。剩下的两个两个例子是作为什么对比的,有什么讲究吗?对于标准中有正负离子两种模式的方法,在定量分析时如果在正离子模式下有检出,还用负离子模式再进行定量分析吗?
79、96与122、170是正离子模式与负离子模式下优化出来的选择出信号较强的两个碎片;定量选用负离子模式,正离子模式是与负离子模式同时进行定性分离,看它们的丰度比的
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原文由 我是风儿(nphfm2009) 发表:
79、96与122、170是正离子模式与负离子模式下优化出来的选择出信号较强的两个碎片;定量选用负离子模式,正离子模式是与负离子模式同时进行定性分离,看它们的丰度比的
感谢风儿老师的解惑,正负离子模式同时采集进行定性分析时,定量时任选一种模式进行定量分析都可以是吗?
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原文由 我是风儿(nphfm2009) 发表:
79、96与122、170是正离子模式与负离子模式下优化出来的选择出信号较强的两个碎片;定量选用负离子模式,正离子模式是与负离子模式同时进行定性分离,看它们的丰度比的
最近新接触液质,对于液质离子源的结构和设置参数不太懂,尤其是各个部件参数实现的目的是什么,前辈请多指点。



比如毛细管电压和裂解电压是不是同一个参数啊;锥孔气是辅助气还是加热气,它的作用是什么?锥孔电压这个锥孔指的是skimmer吗?lens或四极杆有什么参数设置吗?

望路过的同仁和高手们指点迷津,为新人指引方向。万分感谢
welewolf
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symmacros
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酒类里面的物质比较复杂,基质影响比较大,需要用基质配标样。