主题:【第十三届原创】十六种多环芳烃分析的曲折经历

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姜川
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====PART 1 充满疑惑的开始====



2020年3月27日,这天周五,我像往常一样我又开始了兴ku奋bi的做实验。这次是做土壤和沉积物中多环芳烃的方法验证,具体指HJ786-2014这个标准。因为有两个检测器需要验证需要单独验证,所以我觉得先用DAD检测器对十六种多环芳烃进行全光谱扫描(190-800nm),这样就能很快发现十六种目标化合物的保留时间。

这里先说一下我当前的仪器条件:岛津LC-20AT四元低压液相系统,配合二极管阵列检测器(SPD-M20A)和荧光检测器(RF-20A),流动相准备了A乙腈B水C甲醇。流速控制在1ml/min。

想法很美好,但是现实却很残酷。我设置好梯度洗脱程序,进了一针1mg/L的乙腈十六种多环芳烃(没加十氟联苯),设置好计时闹钟,就去办公室忙别的去了。。。

当我还沉浸在三针之内必定将方法优化好的错觉之中的时候,第一针完成的结果却给我沉重的一击。我数来数去发现只有十五个峰。我擦,人品这么差????这十六种多环少说也做了十多次了,怎么这次这么奇怪?我那一个峰被老鼠吃掉了。

我一边让自己不要慌(其实慌得一批),一边开始排查原因:

排查原因

可能性

1

有物质没有分离,两个物质重叠在一起了,只要调整梯度洗脱的程序,必定能发现踪迹。(90%)

90%

2

本佛山吴彦祖人品不好,买的标准品少了一个物质。

10%

3

其他

?%

针对第一个猜想的原因,我设置了不同的梯度洗脱程序,用来观察每个峰是否有分离成为两个峰的迹象,以下是我试验的梯度程序和结果。



一通操作下来,发现并没有改变什么?还是只有十五个峰。。。。。于是我更加慌了。

于是我验证了每一个峰的峰纯度信息,发现这些纯度均为正数,也就是说每个峰代表了一个物质,不存在有两个物质重合的峰出现。

====PART 02 不可思议的原因====



于是我将1mg/L的乙腈中十六种多环芳烃用GCMS走了一针样品,结果发现缺少“菲”。我将公司购买的同一批次的标准溶液又打开一只,发现还是缺少“菲”,这就说明这一批次的标准溶液均缺少这个物质。

这下真相大白了,但是也耽误了不少时间。然后上报领导并且联系供应商。供应商说之前没有遇到过这样的问题,然后就是答应按照之前购买的数目重新免费发新批次的标准溶液给我。但是耽误的时间再也找不回来了。

以下是经过gcms分析的图谱,其中缺少‘菲’。

(此处缺的图以后补上)

====PART 03 意外的结局====



本以为这件事就此尘埃落定,我也能安心的开始做我的方法验证。但是现实再次给我出了个难题。

在4月21日16多环芳烃(DAD)分析过程中发现,十氟联苯的峰位置与HJ748-2016上表示的位置不一致。具体为:HJ748-2016多环芳烃中替代物十氟联苯的位置为第9位,介于(8—芘;9—十氟联苯;10—苯并(a)蒽);而此次发现在该系统中,十氟联苯的位置在第八位

附分析条件:时间程序(见图5):A乙腈B水;检测器DAD;色谱柱:C18硅胶柱 250mm*4.6mm*5um,型号为Shim-pack GIST(Sμm C18);流动相流速:1ml/min。

同时我还发现了另一个现象?

我按照实际情况,将十氟联苯的位置稍作调整,开始了方法验证之旅。至于这个情况,只要不影响定量分析,不管了。



====PART 04 一波三折====



在我完成了二极管检测器的方法验证之后,切换为荧光检测器的时候,诡异的事情发生了。

先说一下准备用荧光检测器做十六种多环芳烃的验证环节的时候。首先找打了岛津公司网站上的应用案例,按道理来说,这种案例应该是比较具有参考性的,毕竟我想标准制定者再怎么水,作为一家仪器公司应该会实际去验证一下,给客户一个比较好的参考。

现实是我又一次错了。

让我们先看下岛津公司提供的相关应用案例。

根据上述时间程序,更改变参时间,匹配我自己的梯度洗脱方法。然后就得到了如下的图谱。



我有点想骂人了,又有点想哭。

然后我又根据HJ784,重新给化合物分组,重新设置时间程序。

发现第七个峰的积分出现问题,重新调整了变参时间。

====part 05 新的问题====



茚并(123-cd)芘和苯并(ghi)苝位置互换了。?

====引用文献====



1. HJ784-2016 《土壤和沉积物 多环芳烃的测定 高效液相色谱法》

2. HPLC法检测土壤中的十六种多环芳烃 form 岛津中国官网
附件:
16种多环芳烃 LC.pdf 所需积分(2)
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米哈伊诺夫
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岛津上面的梯度方法就有问题啊,B初始浓度40,结束的时候变成B为0,你这样的方法批处理怎么走?一般来说,国标方法,稍微优化一下,60分钟左右一针,没问题,不会缺少峰。实在不行,用单标定位。
xiaogumd11
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许之秦
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用多环芳烃专用柱,一般情况16种物质很好出来的
姜川
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原文由 米哈伊诺夫(Insm_8f1c4a3a) 发表:
岛津上面的梯度方法就有问题啊,B初始浓度40,结束的时候变成B为0,你这样的方法批处理怎么走?一般来说,国标方法,稍微优化一下,60分钟左右一针,没问题,不会缺少峰。实在不行,用单标定位。
1.刚开始进行方法开发,并不需要设置批处理。另外b变为0,是用纯乙腈把剩下的的杂质推出去而已。2.六十分钟一针,我个人觉得时间较长,不过在方法开发过程中,可以试用。3.单标定位太奢侈。
姜川
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原文由 xiaogumd11(v3247983) 发表:
就在国标方法上不断优化僦行了
这贴本来是我写的仪器异常记录,为了给以后接手这台仪器的同事作为参考。毕竟供应商基本不会变,很有可能以后还会出现类似的问题。还有就是写一下在方法开发过程中发现问题和解决问题的想法。
姜川
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原文由 寻求奋斗者(v2855535) 发表:
用多环芳烃专用柱,一般情况16种物质很好出来的
嗯??做的时候还没有买,等到采购买回来。我已经做完了。ε=(′ο`*)))唉
姜川
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原文由 许之秦(xianshijiyi) 发表:
排查过程写的很清晰,图文并茂
队长牛逼
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原文由 姜川(Insm_2319aa93) 发表:
嗯??做的时候还没有买,等到采购买回来。我已经做完了。ε=(′ο`*)))唉
好厉害
汽土
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