主题:【第十三届原创】我是如何证明某非洲猪瘟检测试剂盒存在质量问题并成功维权的

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解密双螺旋团队发表于:2020/06/19 16:51:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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6月三等奖
我是如何证明某非洲猪瘟检测试剂盒存在质量问题并成功维权的

1背景

201911月,本单位购入一批某品牌非洲猪瘟检测试剂盒,用于非洲猪瘟病毒核酸荧光定量PCR检测。该试剂盒中的DNA提取为柱式提取,DNA扩增试剂为所有组分预先混合,使用时每个样品按18μL预混液加2μLDNA模板即可,使用非常方便。

简单说一下该试剂盒的结果判定,在阴性、阳性对照成立的情况下,Ct值小于40且有典型扩增曲线的判定为阳性,否则判定为阴性。

2出现问题

购入试剂盒后,本单位即投入使用。在对一个猪场抗凝血进行检测时,结果有40%左右阳性,Ct值介于35~38左右。由于该猪场日常生物安全管理水平较高,该批抗凝血又是从准备销售给外省的生猪中抽样,出现非常猪瘟的可能性不大。出于慎重起见,第二天我们对提取的核酸重新进行扩增,结果仍有40%左右阳性。

由于阳性比例过高,且Ct值较高,怀疑是污染或试剂存在问题。于是要求猪场重新采样,再次进行核酸提取和扩增,结果仍然出现40%左右阳性。

3初步验证

为了分析这些阳性是真阳性还是污染或试剂的问题,我们做了交叉试验,方法及结果如下:

项目该试剂盒提取核酸其他品牌试剂盒提取核酸
该试剂盒扩增核酸阳性率40%阳性率<5%
其他品牌试剂扩增核酸阳性率<5%均为阴性


据此我们认为是该试剂盒存在问题,向厂方提交了质量投诉函,要求调换货。

4厂家验证

接到我们的质量投诉函后,厂方非常重视,派出技术人员打飞的直奔我们实验室进行实验。经过一系列去污染等措施,结果用该品牌试剂盒提取核酸并进行扩增,结果仍然出现阳性,但阳性率明显下降,约为10%。据此技术人员认为是实验室污染所致,但对于为何仍有10%阳性不予置评。此后,厂方一直未同意调换货。

5再次验证

接下来,我们又进行了多次实验,并采取各种防污染措施,但阳性率一直居高不下。对此我们也没有好办法,只能将Ct值超过35的假阳性样品用其他扩增试剂再复核一遍。

今年1月份我们实验室新购进一批qPCR预混液,并合成了一系列不同项目的引物探针(其中非洲猪瘟引物探针与某品牌序列不一致)。2-3月份对不同项目的阳性样品(抗原、疫苗等)进行验证,证明合成的引物探针及qPCR预混液检测效果理想(相关内容将以系列方式在原创大赛发表,敬请期待)。2020年4月1日对某猪场血样进行检测,血样经离心取上清(血浆),采用该品牌的DNA提取试剂盒提取核酸,检测试剂盒进行扩增,扩增图谱见图1(阳性对照是Ct值约25的那根弯弯曲曲的红线)。


后采用T/CVMA5-2018《非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法》提供的引物探针,以及商品qPCR预混液,扩增图谱见图2(所有样品均为阴性,有曲线的5个是为了验证扩增效果添加的阳性核酸)。从两个扩增图谱可以看出,同样用该品牌提取试剂盒提取的核酸,用该品牌的扩增试剂,与商品qPCR预混液扩增相比,效果差异极大,不仅阳性对照存在问题,而且对于正常样品也存在很高的假阳性。


对于商品qPCR预混液的质量,可以从另一个方面来说明:添加的5份阳性核酸,系2019年4月提取后-20℃保存的,至今已近一年。5份阳性核酸当时的扩增结果与本次qPCR预混液扩增结果分别为:18.3/21.9、16.1/18.9、31.1/32.9、30.5/33.0、30.7/33.8。时隔一年两次扩增的Ct值约相差3左右,考虑到核酸保存条件、保存时间以及两次不同的扩增试剂,我们认为两次扩增结果是非常吻合的。这也从一个方面证明本次我们采用的商品qPCR预混液扩增效果非常理想。

综上,我们认为该品牌的检测试剂盒存在质量问题,要求对所购的试剂盒予以全部调换为质量合格的新品。



6同意换货

接到投诉函后,该公司及时与我们进行沟通,一周后同意了我们的诉求,要求我们将所有试剂盒(已使用的提供含有批号等信息的原包装盒)寄还。十天后我们收到了新批号的检测试剂盒,拆开试用,发现该试剂盒已作了改进,反应液与引物探针分两管存放,用前将反应液加入引物探针中充分混匀,然后进行实验,经验证,假阳性现象不复存在。

7思考

作为生产厂家不能一味宠着使用者,还是应该从产品质量出发。目前国产试剂盒多采用反应液与引物探针分别存放的方式,每次使用需计算添加量,混合均匀后分装到每个PCR孔,不是很方便。该品牌或许是考虑到这个因素,将反应液与引物探针合二为一,大大方便了使用者,却不料在检测结果上出了问题。在未解决多种试剂混合后效果不佳问题前,还是应该尊重科学,以分别存放为宜。

作为使用者也不能一味追求方便快捷,还应该以检测质量为重。该麻烦的地方不能图省事,该分步操作的地方就应该按照要求分步操作,不能简单地合二为一。

维权不是简单的事,一般来说生产厂家总量比较强势,有众多的技术人员分析问题所在,也有可能有“大拿”找出各种理由让使用者背锅。作为使用者来说往往缺乏相应的验证手段和理论基础,在厂家面前往往显得比较弱势。但从我们的维权之路看,只要拿出较为有力的证据,厂家还是会虚心接受诉求。
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未央
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想咨询一下楼主是否使用的是农业部和中国疫控中心批准的检测试剂盒呢?有时候对于阳性结果的判断可以通过使用两种试剂盒进行确证。
上党之巅
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Ins_cb862a83
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