主题:【第十三届原创】图说液相色谱的堵和漏两大“病症”—以Agilent1260为例

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xiaogumd11
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6月三等奖
液相色谱仪器广泛应用于环境、医药、石油、化工等领域。在使用过程中,往往会出现堵和漏的现象。堵和漏两者之间存在一定的联系,用中医辩证思维解释就是“通者不漏,漏者不通”堵塞时常伴随着漏液。

我们从下图上可以知道,液相色谱容易发生堵塞的位置大致有溶剂过滤头、混合比例阀、单向出(进)阀、排空阀滤芯、针座、色谱柱、流通池等地方。





本文着重和各位老师交流一下单向出(进)阀、排空阀滤芯、针座、色谱柱、流通池堵塞“诊断”和“治疗”方法。


一、怎么知道系统有堵塞

对于HPLC系统来说:400bar是限压,当压力持续升高到达400bar时,仪器会停止工作并报警。UPLC系统:3000是限压。如果压力是psi单位,1bar=14.5psi进行换算就行了。


当系统持续出现堵塞,压力升高,就可能伴随着漏液的症状,漏液较多时触发仪器报警,原因一:可能某些接头没有拧紧,压力增大情况下发生漏液,原因二:压力过大把石英窗、垫片等压破造成漏液。


怎么检查系统哪里有堵塞


思路:分段检查

1、排空阀滤芯:其更换的方法是如果发现将旧滤芯变色,用细镊子小心取出,再将白色新滤芯放入,白色滤芯豁口向外。如下图。




2、单向出口阀堵塞,整体拆卸下来,用超声的办法进行整体清洗,工程师不建议将单向出口阀完全拆开清洗,因为里面配件较多,组装起来非常繁琐,如果动手能力强的小伙伴们在万不得已情况下可以试一下。如下图:







大致安装顺序是:胶垫-金属垫-白垫-红宝石球-黑色豁口柱体-白垫-红宝石球-金属垫,最外层是金黄色盖。黑色豁口柱体的豁口就是液体流通方向。


单向出口阀出现故障,多见仪器基线波动较大,见下图




换上新单向出口阀问题解决

3、针座

A的仪器,进样针升起后,将针座连接的六通阀的5号位置拆开,用两个小扳手从下面将整个针座撬出取下,或是用尖嘴镊子从自动进样器上面将针座拔出,之后超声清洗。本人用这两种方法试过,均不能取下针座,可能针座卡得紧的原因,如果用力过猛,可能造成卡槽变形。采用另外的方法,针抬起后,打开ALS的门,将连接到六通阀的5,6号的毛细管拆下,位置互换,拧紧,流量设置为1ml/min。在ALS的leak sensor位置放一些吸水纸,防止一会儿从针座流出的液体引起ALS报Leak的错误。冲洗15分钟左右停止后复原。见下图:





4、色谱柱

把色谱柱卸下,装上两通,如果压力下降至一定水平,A的在10bar左右。见下图,说明色谱柱堵塞。用纯甲醇冲时压力正常,用纯水冲压力也正常,但是用甲醇与水一定比例时,压力就一个劲往上升,直到系统自己报警。基本判定是柱子堵了,因为甲醇和水混合的粘度是比较高的。





治疗色谱柱堵塞方法比较简单,断开检测器,如果样品或流动相中有盐,就用100%50度左右的纯水,0.5-1.0流速清洗1-2个小时。情况严重冲洗时间延长,再分别用100%异丙醇、或100%甲醇及其他溶剂冲洗。





比较大的治疗方案是色谱柱反接进行冲洗,将颗粒物等杂质反冲出来,但是这种方法本人不敢轻易尝试,有专家说反冲会降低柱效,相当于杀敌三千,自损八百,万不得已情况下可以试试,建议反冲时间和流速不宜过大和过长。本人试过20多分钟反冲,没有出现明显的柱效下降现象。


5、流通池堵塞


当流通池污染比较严重时,仅仅用流动相冲洗时,不能改善,应将液相色谱柱拆下,把流通池拿出。用注射器将10%的甲醇水,从流通池的进液口打入,持续两到三次。用10%的稀硝酸从进液口打入流通池,持续两到三次。(把流通池拆卸下来,用注射器注入溶剂清洗,主要是方便10%的稀硝酸注入。)用纯水从从进液口打入流通池,持续两到三次,用纯甲醇从进液口打入流通池,持续两到三次,这时重新连接色谱柱。注意的地方是:注射时动作需要轻缓慢,液体缓缓推入,防止压力过大。





三、结语


堵和漏是液相色谱的两大“病症”治疗起来比较麻烦,所以重在预防。网上各品牌液相色谱仪的维护和保养资料很多也很全,培训也较多,总结起来就是“二勤一洁”:

勤换:作为流动相的超纯水、滤芯等需要勤换,防止发霉长菌。

勤洗:即溶剂过滤头勤洗、色谱柱等做完样后需要勤洗,如果有缓冲盐,更需要多次或延长时间用100%超纯水冲洗。

一洁:流动相、样品需要洁净。流动相要求色谱纯级,样品用0.45μm或0.22μm过滤头过滤,特别是基质复杂的样品。
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王哪摸呢
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是工程师总结的吗?感觉挺全面的。单向阀和流通池我没拆过,学到了
xiaogumd11
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对于液相色谱我也在不断学习
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2020/6/23 19:37:31 Last edit by v3247983
sc360xp
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慢生活
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楼主总结得很好呀。对于柱子我的看法是,以前不建议反冲这是因为以前的柱子工艺不行,进口和出口处的筛板孔径大小不一,反冲可能直接把柱填料冲垮。但现在柱子大多都是一样的孔径大小了,月旭的柱子说明书上就建议清洗柱子时反冲。个人觉得,隔一段时间就反冲一下也是可以的。
myoldid
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单向阀堵了或有盐析出,可以直接纯水超声,最好不要拆解开。柱子不建议反冲是担心填料太细从入口端冲出来,常见于1.8um填料的柱子。4.5um的倒是可以反冲
zyl3367898
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Insm_36c4ed33
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洗针的时候从针座下方漏液,是也是针座堵了吗?