主题:【第十三届原创】LC(液相色谱)测挥发酚的失败之族

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huanghe007
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LC(液相色谱)测挥发酚的失败之族



2015年,我花了几个月时间试图将搁置较久的一台Agilent1260 infinity的液相色谱用于测挥发酚。购置时就为此目的但不知何故却搁置较久。配的四元泵和C18小柱。我经过一番长久实验,最后不得不放弃。期间主要做了如下工作。

1. 条件摸索

包括流动相及其比例、流速、波长等方面重复测试。(已另文总结)

2. 样品前处理

把样品先蒸馏后再进行SPE前处理。(准备另文总结,数据信息量太少也可能放弃)

3. 标样的测试

当时挥发酚标样谱图是这样的:

然而最好的样品的谱图却是乱七八糟的:

心里很崩溃。可以套用才学的一句“開いた口が塞がらない”来形容。怎么会这样呢?其实也很正常,水样里不可能就只一种物质。于是查《水和废水监测分析方法》对挥发酚的定义是:通常指沸点在230以下的酚类,通常属一元酚。于是找出了22种一元酚,按沸点在230以下的一元酚列出15种。报购了标样。但只买到以下12种(红色标记)。

序号名称分子量沸点批号定值日期有效日期标物号标称值ug/mL
1苯酚94.11181.7phenol
2甲酚108.15191O-cresol
3间甲酚108.15202.2m-cresol140012014035年GBW(E)0804711.03±3%
4对甲酚108.15201.9p-cresol331902200708201906GSB1307-1238-1999506±25
52,3-二甲基苯酚2182,3-Xylenol433602200707201906GSB1307-1237-20001000±2%
62,4-二甲基苯酚122.182102,4-Xylenol433701199510201901GSB1307-1238-20001000±5%
72,5-二甲基苯酚2102,5-Xylenol433801199510201901GSB1307-1239-20001000±2%
82,6-二甲基苯酚203~2252,6-Xylenol433902200707201906GSB1307-1240-20001000±3%
93,4-二甲基苯酚211-2253,4-Xylenol434001199510201901GSB1307-1241-20001000±2%
103,5-二甲基苯酚2223,5-Xylenol434101199510201901GSB1307-1242-20001000±2%
11邻氯苯酚128.56174.9o-chlorophenol434502200707201906GSB1307-1246-20001000±3%
122,4-二氯苯酚163.012102,4-dichlorophenol140012014105年GBW(E)0804721.04±3%
132,6-二氯苯酚163.01219-2202,6-dichlorophenol
14硝基苯酚139.122160-nitrophenol434202201303201802GSB1307-1243-20001000±3%
15间硝基苯酚139.12194m-nitrophenol434301201104201812GSB1307-1244-20001000±2%

3.1对于间甲酚(Mcresol)和对甲酚(Pcresol)在不同波长测试。信号太强,需要稀释。

M和P各取100uL定到100mL,则浓度为1.03ug/mL,0.506ug/mL。

M和P各取100uL定到50mL,则浓度分别为2.06ug/mL,1.12ug/m。

对以上单标和混标保留时间都一致。也就是说这两者的色谱峰重合,不能有效分开。

序号波长保留时间峰面积峰高文件名phenol-acetonitrile备注
1Mcresol2802.99311846.81640MCRESOLwave280-0011030 ug/mL
2Pcresol2803.0108777.55271297.5PCRESOLwave280-0011000 ug/mL
3M&p2802.97433.884.5M&Pcresol001M1.03ug/mLP0.506ug/mL
4M&p2802.98547.383996.6M&Pcresol002M.2.06 ug/mL, p1.12ug/mL

3.2同样发现用2,3-二甲基苯酚和2,4-二甲基苯酚1000 ug/ml原液,

分别取原液2.0mL定到10ml,C=200ug/ml,分别取原液100uL定到5ml,C=4.0ug/ml,各40uL原液定到10ml,C=4.0ug/ml。将上述溶液分别在不同波长下测得保留时间基本相近。这截取部分数据于表中。



23xylenol2,3-二甲基苯酚)

24xylenol2,4-二甲基苯酚)

波长保留时间波长保留时间
2253.962254.019
2203.9672204.028
2153.9632154.021
2103.9642104.033
2053.952054.033


结论:2,3-二甲基苯酚和2,4-二甲基苯酚两峰不能分开。

3.3将十种不同浓度的标液配在一起后通过在不同时间改变溶剂组分,发现只出现了六到七个峰说明仍然有峰重合现象。

按下表走混合样存于Mix10-010,比较完美







从峰面积判断最后一个是24二氯酚。将时间表改为下表,进24二氯酚证实,24dichlorophe-3,



各峰出峰顺序见下表:

序号

出峰顺序

名称

沸点

英文名称

Mix10001

Mix10-003

保留时间

保留时间

1

0

苯酚

181.7

phenol

未加入

2

1

间硝基苯酚

194

m-nitrophenol

2.761

2.759

3

2

间甲酚

202.2

m-cresol

2.928

2.926

4

2

对甲酚

201.9

p-cresol

同上

同上

5

3

邻氯苯酚

174.9

o-chorophenol

3.17

3.168

6

4

3,4-二甲基苯酚

211-225

3,4-Xylenol

3.496

3.494

7

5

3,5-二甲基苯酚

222

3,5-Xylenol

3.702

3.701

8

硝基苯酚

216

0-nitrophenol

未加入

9

6

2,3-二甲基苯酚

218

2,3-Xylenol

3.925

3.924

10

6

2,4-二甲基苯酚

210

2,4-Xylenol

同上

同上

11

6

2,5-二甲基苯酚

210

2,5-Xylenol

同上

同上

12

7

2,4-二氯苯酚

210

2,4-dichlorophenol

4.852

4.851



后又尝试混合12种标液,改变各种条件,结果都不理想。不得不考虑加缓冲液了。查文献得0.01M的磷酸(取代的酚);或0.01molHAC-NH4AC的PH=4(宣栋梁著HPLC测环境水中的酚类化合物)。

网上查的是PH=4.5配法:称7.7g的NH4AC,加50ml水再加6mlHAC→100ml。

为方便考虑,用分析纯磷酸取约0.7ml→1000ml。0.01M待用于D通道。结果仍然存在重合,且信号回不到基线。也问了厂家说要换柱子。于是只好放弃了。

实验至此,又被派遣做别的工作去了。看以后在没机会继续了。回看自己的实验,显然做了许多无用功。另一方面,询问需求方到底是只做苯酚还是说全做还是选出一部分做。并没有得到明确回复。查找的文献也大多并没测全部,只做了个别峰,也没涉及重合峰的分开。

总之,第一次接触液相色谱,因为各种原因吧虽然不成功也算是有了宝贵直接的体验.。以资分享,借原创之东风,顺便赚点积分,毕竟是我的一点心血。
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