主题:【第十三届原创】铁皮石斛检测分析注意问题

浏览 |回复5 电梯直达
xiaoxiao523
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
河南科高中标检测技术团队发表于:2020/08/10 15:31:07 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明:本文为xiaoxiao523原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。
品牌合作伙伴

铁皮石斛检测分析注意问题


第一次接到铁皮石斛样品的时候我还在论坛求助,确实这个药材相对其他品种属于不好做的,很多论坛都有说跑不出来,下面根据自己做的情况分享一下注意事项。

1 实验材料与设备
1.1 材料
铁皮石斛药材(送检样);乙腈(色谱级),无水乙醇(分析纯);甘露糖、葡萄糖、盐酸氨基葡萄糖(购自中检院),乙酸铵,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮,氢氧化钠,盐酸,三氯甲烷岛津液相LC-20AT配制DAD检测器,安家Eclipse XDB C18 色谱柱(250mm*4.6μm*5μm)恒温水浴锅

1.2 色谱条件

  流动相(参照中国药典2015年第一部):乙腈-0.02mol/L乙酸铵(20 :80)为流动相;检测波长250 nm;柱温:35 ;流速:1.0mL/min,进样量:10μL

2 实验步骤(参照2020药典第一部 铁皮石斛项下)

2.1 校正因子

  取盐酸氨基葡萄糖适量,精密称定,配制成浓度为12mg/mL,作为内标溶液。另取甘露糖对照品约10mg,精密称定,精密加人内标溶液l mL,加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,配制浓度为0.1mg/mL,吸取 0.4 ml,加入0.5mol/LPMP (1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与0. 3mol/L的氢氧化钠溶液各0.4 ml,混匀,70水浴反应100分钟。再加0. 3mol/L的盐酸溶液0.5mL,混匀,用三氯甲烷洗涤3次,每次2mL,弃去三氯甲烷液,水层离心后,取上清液,过0.45μm滤膜注入液相色谱仪待测,计算校正因子。

校正因子公式:fi=(A内标/m内标)/(A甘露糖/m甘露糖



A峰面积,m为加入内标物和对照品的量


图1 盐酸氨基葡萄糖色谱图(12.030min 盐酸氨基葡萄糖色谱峰 10.514min PMP色谱峰 )


图2 甘露糖标品色谱图(9.289min 甘露糖色谱峰,11.876min 盐酸氨基葡萄糖色谱峰 10.532min PMP色谱峰 )



2.2 甘露糖与葡萄糖峰面积比

  取葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成浓度为50 μg/mL ,作为对照品溶液。精密吸取0. 4mL,加入0.5mol/LPMP (1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与0. 3mol/L的氢氧化钠溶液各0.4mL,混匀,70水浴反应100分钟。再加0. 3mol/L的盐酸溶液0.5mL,混匀,用三氯甲烷洗涤3次,每次2mL,弃去三氯甲烷液,水层离心后,取上清液,过0.45μm滤膜,注入液相色谱仪待测。计算甘露糖与葡萄糖的峰面积比。


图4 葡萄糖标品色谱图(19.411min 葡萄糖)



2.3甘露糖含量

  本品粉末(过三号筛)约0. 12g,精密称定,置索氏提取器中,加80%乙醇适量,加热回流提取4小时,弃去乙醇液,药淹挥干乙醇,滤纸筒拆开置于烧杯中,加水100mL,再精密加入内标溶液2ml,煎煮小时并时时搅拌,放冷,加水补至约100mL,混勻,离心,吸取上 清液1ml,置安瓿瓶或顶空瓶中,加3. 0 mol/L的盐酸溶液0.5mL,封口,混匀,110水解1小时,放冷,用3. 0 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性,吸取 0.4mL,加入0.5mol/LPMP (1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液与0. 3mol/L的氢氧化钠溶液各0.4 ml,混匀,70水浴反应100分钟。再加0. 3mol/L的盐酸溶液0.5mL,混匀,用三氯甲烷洗涤3次,每次2mL,弃去三氯甲烷液,水层离心后,取上清液,过0.45μm滤膜,注入液相色谱仪待测。


图4 铁皮石斛样品图

小结: (1)在做铁皮石斛提取的过程中建议大家索氏提取前提前浸泡一晚,除杂效果会更好,滤纸包取出来为了样品提取完全,一定要充分展开浸入水溶液中,水溶液提取 过程中时时振摇这个步骤千万不要省略;

    (2)在110度酸水解过程中一定要水解彻底,然后pH值准确调至中性;

    (3)70度水浴100min,温度和时间都要控制好。



为您推荐
qianguiyun1
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
Insm_3645be66
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
我想说,我做铁皮石斛含量,对照品没出甘露糖峰,是怎么回事
xiaoxiao523
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 Insm_3645be66(Insm_3645be66) 发表:我想说,我做铁皮石斛含量,对照品没出甘露糖峰,是怎么回事
你的甘露糖峰是不是被衍生试剂包住了,衍生试剂的峰特别大!
Insm_3645be66
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 xiaoxiao523(xiaoxiao523) 发表:你的甘露糖峰是不是被衍生试剂包住了,衍生试剂的峰特别大!
Pmp是很大,但是也没分叉,我流动相到18:82,也没有峰
xiaoxiao523
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 qianguiyun1(qianguiyun1) 发表:
铁皮石斛和其它的石斛有什么区别?


1、性状有区别,同属不同种

2、采摘时期不一样

3、根据药典上检测指标也不一样