主题:【第十三届原创】例说谱库检索相似度不高的常见原因和应对措施

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lhl
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例说谱库检索相似度不高的常见原因和应对措施



概述:在质谱分析中,常常会遇到谱库检索相似度不高的情况,那么常见的原因有哪些呢?又该怎样来解决呢?我们借助图例来讨论一下(工作站为岛津GCMSsolution工作站)。

1. 检索时未扣除背景噪音。例如下图中的苯,未扣减背景,仅用峰顶的基础质谱图来检索,相似度只有89。





而扣减背景后,相似度达98。





应对措施:无论是手动定性还是自动定性,都应该设置扣除基线背景。

2. 样品的浓度太低,质谱图受基线干扰大,导致相似度较低。

例如下图:为浓度较高的苯,相似度为97,很高。





如下图中的苯甲醛二甲缩醛,浓度很低,峰强度本身就不高,相似度只有88。





应对措施:提高目标物质的浓度;调小方法中的分流比;使用不分流进样的方式;适当提高MS方法中的检测器电压值。

3. 样品浓度太高,导致检测器饱和,某个或某些离子信号封顶。这时会导致质谱图的离子比率失真,从而检索的相似度下降。

如下图丙酮的m/z 43的碎片饱和。此时以较高点作为基础质谱图,扣背景后检索,相似度只有89。





而如果以较低点(离子未饱和)为基础质谱图,扣背景后检索,相似度则达98。





应对措施:降低目标物质的浓度;调大分流比;适当降低检测器电压。

4. MS的采集方法为SIM而非SCAN方式。俗语说“窥一斑而知全豹”,在MS中是不合适的。在SIM方式中,采集的离子碎片比较少,检索时难以匹配到正确的物质。因为只考察少量离子碎片的话,可能谱库中很多物质都有。

数据文件查看采集方式的操作如下:在再解析程序中,点“视图”——“数据采集设置”——“仪器参数”



下图中红圈中即可以看出此数据文件的采集方式。



应对措施:定性必须以SCAN方式采集数据。

5. 扫描m/z范围未涵盖目标物的主要特征碎片。比如下图中的甲醇,主要特征碎片是29、31、32。如果设置的m/z从32以上开始,得到的相似度会很低,甚至找不到。



应对措施:SCAN方法的设置范围应该将目标物质的主要离子碎片包含在内。

6. 不同的物质出峰时间有部分或者完全重叠。这时会有个比较有趣的现象,就是如果基础质谱图选择的不同位置,观察到的质谱图离子比例会有明显变化。

例如,下图的TIC峰实际是两种物质叠加的,当我们进行相似度检索时选择的是基础点为偏左侧时,质谱图如下:



当选中间最高点时:



当选择右侧点时:



可以看出,三个位置扣减背景之后的质谱图明显不同。实际是因为这个峰是两种物质碎片的叠加,所以选不同的位置时,碎片比例都会不同。



应对措施:使用碎片表或者差减法分别找出两种物质。可参考:

https://bbs.instrument.com.cn/topic/7612465_1

6. 谱库中并未录入目标物。这也是有可能的,不过遇到的比较少。

应对措施:准备更丰富的谱库,或者自建一些化合物的谱库。自建谱库可参考:

https://bbs.instrument.com.cn/topic/7613148_1

小结:谱库检索相似度不高的常见原因解析及应对措施。
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symmacros
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总结的很全面,包含的各种检索匹配不好的情况。
lhl
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原文由 symmacros(jimzhu) 发表:
总结的很全面,包含的各种检索匹配不好的情况。
朱老师速度真快啊,刚发了就看了
Insm_674861db
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可以问一下为什么我配出来的物质检索出来不是我需要的物质吗而且做曲线的时候找不到所需的离子,是什么原因。
wazcq
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lhl
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原文由 Insm_674861db(Insm_674861db) 发表:可以问一下为什么我配出来的物质检索出来不是我需要的物质吗而且做曲线的时候找不到所需的离子,是什么原因。
可以具体说说
lhl
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原文由 wazcq(wazcq) 发表:并非每次都要扣背景
扣背景后的质谱图更接近真实,更容易找到
骚动的大叔
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收下我的小膝盖,我觉得要是我跟老师你好好学习一段时间我就不会越到老多问题了
Insm_674861db
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原文由 lhl(lhl8595) 发表:可以具体说说
就是我配了一个混标,然后去用MRM方法走了一条标线,去做标线的时候,发现其中一个物质检索出来不是我需要的,但是那个峰保留时间是对的上的,而且这个物质的离子还少了一个,做标准曲线的时候用数据去拉发现没有值,标准曲线做不出来。
wazcq
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原文由 lhl(lhl8595) 发表:
扣背景后的质谱图更接近真实,更容易找到
对于信噪比很高,只是定性而言 直接搜效率更高
之宣
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