主题:【第十三届原创】藤青泡腾片提取工艺研究

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鹤壁农检联合队发表于:2020/09/21 21:37:06 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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9月一等奖
藤青泡腾片提取工艺研究

藤青泡腾片是以闽产药食资源为基础制成的复方制剂,处方由藤茶、青果、葛花、甘草4味药材组成,具有调节血脂,保护化学性肝损伤的作用。传统中药煎煮繁琐,携带不便,气味较苦,将其制成泡腾片,携带、服用方便,崩解速度快,提高其生物利用度、临床疗效。

本处方中各味药的主要有效成份为黄酮,水溶性较好,且二氢杨梅素等在热水中的溶解度大,因此采用水为提取溶液进行加热提取,成本低、实验条件简单。采用正交试验的方法考察各因素对总黄酮、浸膏得率的影响,获得最佳提取工艺。

1.1仪器与试药

(1)实验仪器

电子分析天平XS105METTLER TOLEDO
电子调温电热套98-1-B天津市泰斯特仪器有限公司
电热恒温水浴锅HWS24上海一恒科学仪器有限公司
常压恒温干燥箱XMTD-822上海精宏实验设备有限公司
紫外分光光度计UV9100北京瑞利分析仪器公司
移液枪(200 μL1000 μLGILSON


(2)实验试药

葛花 产地:安徽  北京三和药业有限公司

藤茶(产地:广西)、青果(产地:广东)、甘草(产地:甘肃)

芦丁对照品批号:100080-20708

中国食品药品研究院
甲醇 (AR)国药集团化学试剂有限公司
亚硝酸钠(AR)上海联试化工试剂有限公司
硝酸铝(AR)上海展云化工有限公司
氢氧化钠(AR)上海联试化工试剂有限公司


1.2 泡腾片提取工艺条件的研究

1.2.1正交试验筛选

称取藤茶、葛花、青果、甘草各0.5倍处方量为1份,共9份,以加水量(A),提取时间(B),提取次数(C)为考察因素,按表1的因素水平进行L9(34)正交试验,根据总黄酮含量、浸膏得率进行评价,考察最佳提取工艺条件。

1.2.1.1水提取液浸膏得率的测定

吸取1.2.1项下提取的每份药液15 ml,转移到干燥蒸发皿内,置于水浴锅内蒸发水份至流浸膏后,放入烘箱于100℃烘干到恒重,称重,记录结果并计算,结果见表2

1.2.1.2水提取液总黄酮的含量测定

对照品溶液的制备:称芦丁对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并定量稀释至每1 ml含0.2 mg的芦丁溶液,制得对照品溶液。

供试品溶液的制备:取上述9份提取物各1 ml,于50 ml容量瓶中,并用水稀释至刻度。

芦丁对照品标准曲线制备:精密吸取芦丁对照品溶液0.01.02.03.04.05.06.0 ml,分别置25 mlV3)量瓶中,加水至6 ml,加入1 ml的5% NaNO2,混匀,放置6min,往容量瓶里加入1 ml的10%Al(NO3)3,混匀后静置6min,加入10 ml NaOH试液,混匀,加蒸馏水至刻度,混匀,静置15分钟,以0.0 ml对照品溶液制备的溶剂为空白对照,在510nm波长下测定各组的吸光度值。以吸光度为纵坐标(A),浓度为横坐标(mg/ml),绘制标准曲线,结果见图1

样品测定:吸取待测溶液10 mlV2)于25 ml容量瓶中,照芦丁对照品标准曲线制备自“加入1 ml5% NaNO2”起,在波长510nm下测定样品的吸光度,

X)。

根据标准曲线求出样品中总黄酮的含量结果计算:





X—试样中总黄酮百分含量,以芦丁(C27H30O16)计, g/100gml);

C—标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的浓度,mg/ml

V1试样定容体积,ml

V2吸取供试液体积,ml

V3显色定容体积,ml

M—试样取样量,g(ml)

结果见表2,表3.           

1 提取正交试验因素水平表

水平

因素

A加水量()

B提取时间(h)

C提取次数

1

10

0.5

1

2

15

1.0

2

3

20

1.5

3



注:以D因素为误差项

1芦丁标准品标准曲线 



采用加权平均法对浸膏得率、总黄酮含量进行综合评估,由于含量对泡腾片疗效的影响较大,因此,分别给予浸膏得率、总黄酮含量40%60%的权重进行分配。浸膏的率越高,患者最终单次的给药量越多,较低较好,以最低得率19.808%为最高得分,而总黄酮为主要有效成份,宜越高越好,故以1.969为最高得分。以序号1为例计算综合评分:(19.808/19.808)*0.4+(0.796/1.969)*0.6=0.643,同理,可求得其余各综合评分,结果见表2.

2提取正交试验结果(n=9

序号

A

B

C

D

浸膏得率(%)

总黄酮含量(g)

综合评分

1

1

1

1

1

19.808

0.796

0.643

2

1

2

2

2

29.159

1.109

0.610

3

1

3

3

3

34.835

1.499

0.684

4

2

1

2

3

33.656

1.490

0.689

5

2

2

3

1

37.467

1.854

0.776

6

2

3

1

2

23.851

0.978

0.630

7

3

1

3

2

40.161

1.969

0.797

8

3

2

1

3

26.402

1.099

0.635

9

3

3

2

1

34.196

1.544

0.702

K1

1.94

2.13

1.91

2.12

   

K2

2.10

2.02

2.00

2.04

   

K3

2.13

2.02

2.26

2.01

   

R

0.07

0.04

0.12

0.04

 

 

 

3提取正交试验方差分析

方差来源

离差平方和

自由度

F

均方

显著性

加水量

0.007349

2

3.2139

0.003675

 

提取时间

0.002731

2

1.1945

0.001366

 

提取次数

0.02189

2

9.5733

0.01095

**

误差

0.002287

2

1.0000

0.001143

 


由表3可知,根据水提取液中总黄酮含量与浸膏得率进行评估,各因素对结果的影响大小:提取次数>加水量>提取时间,即主要影响因素是提取次数,其次是加水量,提取时间影响最小。以实验结果为参考,结合实际生产情况,最终确定提取工艺为:加水20倍量,每次提取0.5h,提取3次。

1.2.2提取正交验证实验

根据以上所选最佳提取工艺条件,加水20倍量,每次提取0.5h,提取3次,平行3份,对水提取液的浸膏得率与总黄酮含量进行测定,按1.2.1.2项下的方法计算综合评分后,求平均得分,结果见表4.

4提取正交实验验证结果(n=3

编号

浸膏得率(%)

总黄酮含量(g)

综合评分

平均得分

1

37.3

2.036

0.833

0.830

2

38.1

2.038

0.829

3

37.4

2.021

0.828



由表4可知,3份平行实验最终的平均得分为0.830,接近于正交设计中的A3B1C3综合评分,且评分最高,有良好的重复性和较高的准确率,所筛选的提取工艺条件基本稳定,可作为藤青泡腾片的提取方法。

小结与讨论

在提取工艺的探讨过程中,用正交试验的方法研究加水量、提取时间、提取次数对药液浸膏得率和总黄酮含量的影响,获得最适提取条件为:20倍量水,提取3次,每次提取0.5h。试验中发现,青果为橄榄的干燥果实,本处方中用量较少,为方便称取,同时提高没食子酸等有效成份的提取率,宜先将其进行粉碎;藤茶、葛花密度小,提取过程中浮于水面,应将其充分润湿,使其浸没于水中,以免影响各成份的提取率;若直接加热煎煮,提取过程中水分蒸发严重,实验结果重现性差,宜采用冷凝回流的方法进行提取。
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zyl3367898
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用正交试验得到最佳的提取方式,好文章。