主题:【第十三届原创】藤青泡腾片纯化工艺研究

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鹤壁农检联合队发表于:2020/09/24 11:53:29 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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藤青泡腾片纯化工艺研究



由于提取工艺中采用水为溶剂,其极性大,浸出范围广,选择性较差,药材中的有机酸盐、多糖、蛋白质、类、黄酮等均能被浸出,所含与疗效无关的成份较多,使浸膏得率偏高,患者每天所需服用量大,顺应性差,因此采用适当的方法进行纯化。本实验采用醇沉的方法对药液进行纯化,沉淀除去液中的多糖、蛋白质等杂质,以提高有效成分纯度用正交试验的方法考察各因素对醇沉结果的影响,筛选最佳醇沉条件。

仪器与试药

1实验仪器

低温冷却液循环泵DLSB-5/20郑州长城科技工贸有限公司
循环水式多用真空泵SHB -郑州长城科技工贸有限公司
旋转蒸发仪RE-2000上海亚荣生化仪器厂
低速多管离心机LXJ-B上海飞鸽电器厂


2实验试药

无水乙醇 (AR)国药集团化学试剂有限公司


泡腾片醇沉工艺条件的研究

醇沉正交试验筛选

称取药材藤茶、葛花、青果、甘草各0.5倍处方量,共1份,按1.2.1项所筛选的最佳提取工艺A3B1C3,即20倍量水、提取0.5h、提取3次,合并3次提取液,分成9份,每份350 ml,以提取液浓度(A),含醇量(B),醇沉时间(C)为考察因素,按表5的因素水平进行L9(34)正交试验,并以总黄酮提取量、干浸膏得率为评价指标,考察最佳醇沉工艺条件。

醇沉浸膏得率的测定

精密量取上述醇沉后药液5 ml,参照1.2.1.1”项下的方法测定浸膏得率,结果见表6

醇沉后总黄酮的含量测定

对照品溶液的制备:对照品溶液的制备:芦丁对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并定量稀释至每1 ml0.2 mg芦丁溶液,制得对照品溶液

供试品溶液的制备:取上述9份醇沉后药液各1 ml,置50 ml容量瓶中,并用水稀释至刻度。

芦丁对照品标准曲线制备:芦丁对照品标准曲线制备:精密吸取芦丁对照品溶液0.01.02.03.04.05.06.0 ml,分别置25 mlV3)量瓶中,加水至6 ml加入1 ml5% NaNO2混匀,放置6min往容量瓶里加入1 ml10%Al(NO3)3混匀后静置6min,加10 ml NaOH试液,混匀,蒸馏水至刻度,混匀静置15分钟,以0.0 ml对照品溶液制的溶剂为空白对照510nm波长下测定各组的度值。以吸光度为纵坐标(A),浓度为横坐标(mg/ml),绘制标准曲线, 结果见图2.

样品测定:精密吸取精密吸取供试溶液8 mlV2),至25 ml量瓶中,照1.2.1.2”加入5%亚硝酸钠溶液1 ml”起,在波长510nm处分别测定吸收度值,从标准曲线上读出供试品溶液中含总黄酮的浓度(C),计算样品中总黄酮的含量(X)。

计算方法:参照1.2.1.2”项下的计算方法进行计算。结果见表6,表7.

2 芦丁标准品标准曲线

5醇沉正交试验因素水平表

水平

因素

A药液相对密度

B含醇量(%)

C沉时间(h)

1

1.0035-1.0039

60

16

2

1.0009-1.0016

70

20

3

0.9959-0.9965

80

24



注:以D因素为误差项

采用加权平均法对浸膏得率、总黄酮含量进行综合评分,由于含量对泡腾片疗效的影响较大,因此,分别给予浸膏得率、总黄酮含量40%60%的权重进行分配。浸膏的率越高,患者最终单次的给药量越多,宜越低越好,故以最低得率18.68%为最高得分,而总黄酮为主要有效成份,宜越高越好,故以1.625为最高得分。以序号1为例计算综合评分:(18.680/28.002)*0.4+(1.190/1.625)*0.6=0.706,同理,可求得其余各综合评分,结果见表6.

6醇沉正交试验结果(n=9

序号

A

B

C

D

浸膏得率(%)

总黄酮含量(g)

综合评分

1

1

1

1

1

28.002

1.190

0.706

2

1

2

2

2

18.680

0.863

0.719

3

1

3

3

3

27.900

1.143

0.690

4

2

1

2

3

30.799

1.405

0.761

5

2

2

3

1

30.447

1.370

0.751

6

2

3

1

2

28.441

1.313

0.747

7

3

1

3

2

32.887

1.592

0.815

8

3

2

1

3

31.601

1.582

0.820

9

3

3

2

1

31.258

1.625

0.839

K1

2.11

2.28

2.27

2.30

   

K2

2.26

2.29

2.32

2.28

   

K3

2.47

2.28

2.26

2.27

   

R

0.12

0.00

0.02

0.01

 

 

 

7 醇沉正交试验方差分析

方差来源

离差平方和

自由度

F

均方

显著性

相对密度

0.02185

2

205.2415

0.01093

**

含醇量

0.00003302

2

0.3101

0.00001651

 

沉时间

0.0007093

2

6.6615

0.0003547

 

误差

0.0001065

2

1.0000

0.00005324

 


由表7可知,以总黄酮含量与水提取液浸膏得率为评价指标,各因素对结果的影响大小为:药液相对密度>沉时间>含醇量,即主要影响因素是药液相对密度,其次是醇沉时间,含醇量影响最小以实验结果为参考,结合实际生产情况,最终确定醇沉工艺为:药液相对密度为0.9959-0.9965含醇量70%,醇沉时间20h

醇沉正交验证实验

根据以上所选最佳醇沉工艺条件,相对密度为0.9959-0.9965含醇量70%,醇沉时间20h,平行3份,对醇沉后药液的浸膏得率与总黄酮含量进行测定,按2.2.1.2项下的方法计算综合评分后,求平均得分,结果见表8.

8醇沉正交实验验证结果(n=3

编号

浸膏得率(%)

总黄酮含量(g)

综合评分

平均得分

1

27.9

1.780

0.925

0.918

2

28.4

1.757

0.911

3

28.4

1.776

0.918



由表8可知,最佳醇沉工艺的平均得分0.918,大于正交设计中的各项综合评分,且评分最高,有较高的准确率,所筛选的醇沉工艺条件基本稳定,可作为藤青泡腾片的醇沉方法。

小结与讨论

通过正交实验,确定最佳醇沉工艺为:将药液浓缩至相对密度为0.9959-0.9965含醇量70%,醇沉时间20h。醇沉正交试验过程中,各实验组尽可能采用同一批次的提取液,以排除提取因素对结果的影响,且提取液放置过程会有少许沉淀,取样时应先混匀;测定相对密度时,要待浓缩的药液冷却至室温后再测,因高温会是玻璃比重瓶体积变大,导致结果不准确;加入乙醇的过程中,乙醇的滴加速度以及搅拌速度应当一致,到醇沉时间后,及时分离出沉淀物并用旋转蒸发仪回收乙醇。
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