主题:【已应助】同一色谱条件下,不同的色谱行为

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qhyy
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LCMS仪器为岛津LC-30A+AB4500,色谱柱waters X-Bridge C18 100*2.1*3.5,梯度洗脱,A相0.1%甲酸水溶液,B相乙腈,初始梯度5%的乙腈,维持0.5分钟后,1分钟内梯度升为100%乙腈,再维持1分钟,然后0.5分钟内降为5%乙腈,维持1.5分钟。该色谱条件下,两次跑样的结果不同,第一次的时候在1.7分钟出峰,隔周后出现两个峰,大峰在0.6分钟出,小峰在1.7分钟出,都是目标峰。与此同时,在第二次进样时,采用5%、30%、50%、70%等度洗脱时,目标峰都在0.6分钟出峰,感觉色谱柱不保留似的。该色谱柱为新购色谱柱,第一次使用前先用纯乙腈0.2ml/min冲了数小时,用完后50%甲醇冲洗,保存在乙腈中,当第二次使用时就出现了如上状况。还请高手出手解疑,不胜感激。
最佳答案:hujiangtao回复于2020/10/20
查一下分子结构,有可能待测物极性太强,在反向色谱柱上保留弱,可以试一下hillic/Amide等正相柱;目标物结构含有氨基容易在酸性环境离子化,用乙腈/水试下,不行的话再加氨水,如氟苯尼考胺加氨水后保留时间明显后移

也有可能标准品时间长了是不是降解了
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查一下分子结构,有可能待测物极性太强,在反向色谱柱上保留弱,可以试一下hillic/Amide等正相柱;目标物结构含有氨基容易在酸性环境离子化,用乙腈/水试下,不行的话再加氨水,如氟苯尼考胺加氨水后保留时间明显后移

也有可能标准品时间长了是不是降解了
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2020/10/20 9:06:57 Last edit by hujiangtao
qhyy
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:查一下分子结构,有可能待测物极性太强,在反向色谱柱上保留弱,可以试一下hillic等正相柱
确实,可能是这个原因,因为样品为万古霉素,溶解的溶剂就是水,不过看文献,有用C18柱的报道。
qhyy
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原文由 qhyy(qhyy) 发表:确实,可能是这个原因,因为样品为万古霉素,溶解的溶剂就是水,不过看文献,有用C18柱的报道。
不过,按道理在色谱柱上的保留行为变化如此之大的
hujiangtao
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原文由 qhyy(qhyy) 发表:确实,可能是这个原因,因为样品为万古霉素,溶解的溶剂就是水,不过看文献,有用C18柱的报道。
万古霉素用双电荷准分子离子峰,响应一般,我们用W家TQ做过,流动相乙腈水
qhyy
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:万古霉素用双电荷准分子离子峰,响应一般,我们用W家TQ做过,流动相乙腈水
先换另外一根X-Bridge C18试试,不行的话,用X-Select HSS T3再试试,看看到底是什么原因
qhyy
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:万古霉素用双电荷准分子离子峰,响应一般,我们用W家TQ做过,流动相乙腈水
换过了一根X-Bridge柱,结果一样,上周进样与这周进样的唯一区别就是上周样品中加入了血浆,这周进样血浆是用0.1%的甲酸代替的…
qhyy
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尝试更换了色谱柱,发现还是出现一样的结果,但是为什么会出现双峰呢?
qhyy
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问题终干解决,但是还有疑问需要验证…
m3036177
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qhyy
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原文由 m3036177(m3036177) 发表:溶剂效应 少进点
重新配制了个样品就好了