主题:【求助】菌破壁离心,纯化酶

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Insp_b1631cb7
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各位大神们,本人小白一枚,最近在把重组的大肠杆菌破壁离心,取上清过柱子,纯化酶,但是酶活非常低甚至没有了,正在找问题,请各位大神指教啊,(1)用来破壁的液体,一般要用pbs缓冲液嘛,ph多少的,pbs里面要加氯化钠嘛,一般ph是多少?(2)我上的镍柱,结合液是20mmol/L的pbs.ph值为7.4的,里面还加了0.5mlo/L的氯化钠,5mmol/L的咪唑。洗脱液是20mmol/L的pbs.ph值为7.4的,里面加了0.5mlo/L的氯化钠,500mmol/L的咪唑,我这个有没有问题呀。(3)我当时透析用的水,透析了30小时吧,用的转子,里面加的冰,换了4次水,是不是应该也要用缓冲液透析呢,用pbs嘛,那这里面不需要加盐吧。(4)我们这个酶用来降解的物质会跟pbs还有盐酸反应,我也担心测酶活时会受缓冲液影响。请各位大神指教啊(5)这个破壁用的以及透析用的缓冲液需要灭菌或除菌嘛,一般都怎么操作
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