主题:【原创】药物中基因毒性杂质甲磺酸烷基酯类物质的检测 by GS-Tek

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药物中基因毒性杂质甲磺酸烷基酯类物质的检测

—气相色谱-质谱串联法

简介

近年来药物中基因毒性杂质的检测成为人们关注的焦点,基因毒性杂质是指直接或者间接损伤细胞 DNA,产生致突变和致癌作用的物质,常见的基因毒性杂质有甲磺酸烷基酯等。

拉米夫定可以抑制 HIV 和乙型肝炎病毒。在拉米夫定合成过程中磺酸类化合物作为反应试(如甲磺酸),醇类化合物作为溶剂(如甲醇,乙醇和异丙醇,因此药物中存在杂质甲磺酸甲酯MMS,甲磺酸乙酯EMS,甲磺酸异丙酯(IPMS)  基于药物的每日最大剂量 300mg,杂质含量要求低于 5ug/ml

本文用气相柱GSBP-INOWAX 30m-0.25mm-0.25um 建立了液体直接进样法分析药物中甲磺酸烷基酯的 GC/MS 方法,该方法快速,稳定并且灵敏度满足了对微量分析的要求。

样品制备



分别取10mg MMS EMSIPMS溶于10ml NN-二甲基甲酰胺溶剂中为标准品储备液。用溶剂稀释储备液制成 1000ug/mL 混标加入 200mg/ml 的拉米夫定中制成样品加标的溶液待用。

GC 条件

色谱仪: GCMS-QP2010

色谱柱: GSBP-INOWAX30m-0.25mm-0.25umPN2025-3002

进样体积:1.5uL

进样模式:分流进分流比:51

衬管: 分流衬管进样口温度:200 °C 柱温:

100 °C 下保持3分钟

15°C/min 升至220 °C,保持16分钟柱流速: 1.46 mL/min 恒流

载气:氦气



MS 条件

传输线温度:240°C 离子源温度:240°C 电离能:70 eV

增益:1.5 kV


结果:

由于甲磺酸酯类化合物极性强在非极性或者弱极性的色谱柱上不能基线分离MMSIPMS。该方法实现了3种化合物的基线分离,见图1

根据国际药品注册协调会议(ICH)的规定进行方法验证具体数据见表格 1

检出限和定量限分别是 3 倍信噪比(S/N)10 倍信噪比(S/N)的数值方法的精密度是同一浓度1.5ug/ml 样品连续六次进样(n=6)得到方法中间精密度是在同一实验室在不同的六天测得同一浓度 1.5ug/ml 样品得到

结果表明该方法具有很好的重现性和稳定性成功的应用于拉米夫定中甲磺酸烷基酯类化合物的检测

表格 1 GC/MS 法分析 MMS, EMS IPMS 数据验证

参数MMS(m/z 110)EMS (m/z 124)IPMS(m/z 137)

检测(ug/mL)0.50.50.5

定量限 (ug/mL)1.51.51.5

方法密度 (RSD, %)1.991.361.55

方法(RSD, %)2.081.581.86

线性(ug/mL)1.5–6.01.5–6.01.5–6.0

线性0.9990.9990.999

斜率603329798273058

截距15242800113134

1.5ug/ml 样品回收率(%)

1102.0102.495.0

2104.0104.895.0

3105.3106.4107.1

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原文由p3276347(p3276347)发表:260/280
感觉比较耐温度,比一般WAX柱高一些。