主题:【讨论】血药浓度方法学验证的问题

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qhyy
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采用LCMSMS方法做血药浓度方法学验证,发现在定量下限和低浓度范围内,有时候做出来是合格,有时候做出来却是超出质控范围?在高浓度范围内相对比较正常,提取回收率大概在40%左右。论坛中各位有遇到类似问题的吗?还请各位不吝赐教。
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hujiangtao
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在低浓度范围内目标物响应低,可能造成定量不准确
qhyy
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:在低浓度范围内目标物响应低,可能造成定量不准确
现在的结果是低浓度范围的质控样品总是超出限度范围
welewolf
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这种情况应该是基质效应问题,建议楼主再优化一下前处理方法,特别是净化步骤
qhyy
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原文由 welewolf(v2823651) 发表:这种情况应该是基质效应问题,建议楼主再优化一下前处理方法,特别是净化步骤
我对色谱图仔细分分析了下,认为是基线抬高的问题,样品进样时有时候基线稳定,有时候就莫名抬高。
该帖子作者被版主 v28236515积分, 2经验,加分理由:鼓励交流
welewolf
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原文由 qhyy(qhyy) 发表:我对色谱图仔细分分析了下,认为是基线抬高的问题,样品进样时有时候基线稳定,有时候就莫名抬高。
标准曲线会出现这种基线抬高的问题吗?如果也会的话,可能是某些化合物的质谱参数或者液相条件没有优化好;如果不会的话,我还是认为属于基质效应的问题
qhyy
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原文由 welewolf(v2823651) 发表:标准曲线会出现这种基线抬高的问题吗?如果也会的话,可能是某些化合物的质谱参数或者液相条件没有优化好;如果不会的话,我还是认为属于基质效应的问题
标曲也会,有时上一针和下一针的基线情况差别很大,导致低浓度时变异情况就很大。但我觉得质谱优化条件导致的问题应该不太可能,色谱条件的可能性是不是更高?现在被这个问题搞死了,总是在低浓度出问题,不过我通过手动积分,把可能的基线波动给去掉,数据基本上就是好的。基质效应我考查过,都是好的,基质影响不大,主要是提取回收率不高,只有40%。
Insm_e13f9b13
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welewolf
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原文由 qhyy(qhyy) 发表:标曲也会,有时上一针和下一针的基线情况差别很大,导致低浓度时变异情况就很大。但我觉得质谱优化条件导致的问题应该不太可能,色谱条件的可能性是不是更高?现在被这个问题搞死了,总是在低浓度出问题,不过我通过手动积分,把可能的基线波动给去掉,数据基本上就是好的。基质效应我考查过,都是好的,基质影响不大,主要是提取回收率不高,只有40%。
从你的峰形来看,是有一些拖尾的,梯度洗脱的话,可以尝试在该物质出峰范围内将梯度的斜率加大一些,即让有机相比例增加的快一些;也可以适当增加流速;或者将流动相中的有机相换成洗脱能力强一些的,比如把甲醇换成乙腈
qhyy
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原文由 welewolf(v2823651) 发表:从你的峰形来看,是有一些拖尾的,梯度洗脱的话,可以尝试在该物质出峰范围内将梯度的斜率加大一些,即让有机相比例增加的快一些;也可以适当增加流速;或者将流动相中的有机相换成洗脱能力强一些的,比如把甲醇换成乙腈
我水相是千分之一甲酸,有机相是乙腈,出峰段已经是纯有机相了,但是确实拖尾严重,影响检测结果,试过改善峰形,但是通过调节梯度比例没有效果,现在尝试在乙腈中加酸,看能不能有所好转
welewolf
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原文由 qhyy(qhyy) 发表:我水相是千分之一甲酸,有机相是乙腈,出峰段已经是纯有机相了,但是确实拖尾严重,影响检测结果,试过改善峰形,但是通过调节梯度比例没有效果,现在尝试在乙腈中加酸,看能不能有所好转
建议你适当调大一点流速试试,别忘了还可以调节柱温的