主题:【已应助】采用GB/T 22388-2008中液质串联法测定三聚氰胺存在的问题

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        近期接触到奶粉、液态奶中三聚氰胺项目的检测,采用的方法是GB/T 22388-2008中第二法——液质串联法,下面总结一下所遇到的问题及解决思路,希望大家可以一起探讨指教。

        一、前处理方面

      1.1 待测样品中蛋白沉淀不够测定

      GB/T 22388-2008中第二法的前处理过程为待测样品加入8mL的1%三氯乙酸加2mL乙腈,去除蛋白和提取待测液,涡旋高速离心后(9000r/min)。部分待测样品仍然十分浑浊,尤其是奶粉样品,导致后期的滤纸过膜和过柱难以进行。

      解决思路:1)对离心后仍浑浊的样品上清,进行过0.45μm的水膜;已试过,效果不好

                      2)改变提取液和蛋白沉淀的浓度和种类。如a.提高三氯乙酸的浓度,增加至3%或者5%;b.改变三氯乙酸和乙腈的比例;c.增加蛋白沉淀剂亚铁氰化钾和乙酸锌。

      1.2 空白样品有干扰

        大部分实验中所做的空白,均能检出三聚氰胺,但其含量很低,一般为几个PPm左右。

        解决思路:对整个实验过程进行排除。1)整个过程中的试管均换为全新的试管;2)进行过柱与未过柱样品之间的比较,来判断是否由柱子引入的干扰。

      1.3 外标曲线的线性不好

        因目前手上暂无空白的基质样品,所以是采用的试剂标准曲线,发现奶粉和液体乳样品的基质效应很强,且为抑制效应。

        解决思路:已采购13C3三聚氰胺同位素,来进一步地进行定量。

        近期12月中旬会开始会这些问题进行一一优化和思路验证,后期会把结果一一附上。同时也希望大家可以提出宝贵的意见和经历。
最佳答案:hujiangtao回复于2020/12/02
“一般为几个PPm左右”这个数据已经很高了,可能还是前处理过程中使用的离心管等带入的

对于奶粉样品可以在三氯乙酸溶液中加入5%乙酸铅除蛋白效果还不错,上清液浑浊的话可以用滤纸过滤以后再过MCX柱

现在正常市面上买的液态奶和奶粉不大可能含有三聚氰胺的,可以作为空白配置基质曲线,或者如楼主用的同位素内标法都是解决基质效应很好的方式
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“一般为几个PPm左右”这个数据已经很高了,可能还是前处理过程中使用的离心管等带入的

对于奶粉样品可以在三氯乙酸溶液中加入5%乙酸铅除蛋白效果还不错,上清液浑浊的话可以用滤纸过滤以后再过MCX柱

现在正常市面上买的液态奶和奶粉不大可能含有三聚氰胺的,可以作为空白配置基质曲线,或者如楼主用的同位素内标法都是解决基质效应很好的方式
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2020/12/2 9:38:20 Last edit by hujiangtao
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
“一般为几个PPm左右”这个数据已经很高了,可能还是前处理过程中使用的离心管等带入的

对于奶粉样品可以在三氯乙酸溶液中加入5%乙酸铅除蛋白效果还不错,上清液浑浊的话可以用滤纸过滤以后再过MCX柱

现在正常市面上买的液态奶和奶粉不大可能含有三聚氰胺的,可以作为空白配置基质曲线,或者如楼主用的同位素内标法都是解决基质效应很好的方式


谢谢,老师的解答。目前我们也在考虑是否是离心管及过柱引入的。

老师。你说的乙酸铅,我是看GC-MS第三法中所用到的,但是我会有一个担心,解离出来的铅离子是否会与后期阳离子交换柱结合,影响三聚氰胺的富集。对于亚铁氰化钾和乙酸锌的使用也存在这样的担心。前处理中我们也进行了滤纸过滤这一块,但是有些连滤纸都过不下去的。
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一万转离心,上清液如果还是有点浑浊,我们是过密理博的0.45PTFE滤膜后过柱净化,此外,三聚氰胺最好用内标法定量,外标法仪器响应不稳定。
hujiangtao
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原文由 p3124248(p3124248) 发表:

谢谢,老师的解答。目前我们也在考虑是否是离心管及过柱引入的。

老师。你说的乙酸铅,我是看GC-MS第三法中所用到的,但是我会有一个担心,解离出来的铅离子是否会与后期阳离子交换柱结合,影响三聚氰胺的富集。对于亚铁氰化钾和乙酸锌的使用也存在这样的担心。前处理中我们也进行了滤纸过滤这一块,但是有些连滤纸都过不下去的。
乙酸铅基本都沉淀到蛋白里面了,一般不会影响目标物在MCX柱上富集的,我们考核时都是这么做不影响回收率的。滤纸用那种快速过滤的,能起到一些作用
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2020/12/2 12:53:54 Last edit by hujiangtao
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表: 乙酸铅基本都沉淀到蛋白里面了,一般不会影响目标物在MCX柱上富集的,我们考核时都是这么做不影响回收率的。滤纸用那种快速过滤的,能起到一些作用
好的,谢谢老师,最近做实验验证一下。
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原文由 weiqing(weiqing1983) 发表:一万转离心,上清液如果还是有点浑浊,我们是过密理博的0.45PTFE滤膜后过柱净化,此外,三聚氰胺最好用内标法定量,外标法仪器响应不稳定。
这个材质的是水系的还是有机的呢?