主题:【已应助】液相用甲醇冲洗后压力变大

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Insp_f0046f75
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用柱子分析了血浆样品,前处理不太干净,导致柱子里面杂质太多,我用纯甲醇冲洗了两个小时,发现柱压升高很多。想请大家分析分析原因,像这种情况如何降低柱压,如何清洗柱子,先提前感谢大家了
最佳答案:歪果仁zZ回复于2021/03/05
前处理一定要彻底,如果是沉淀蛋白,甲醇或乙腈的量一定要足够。进样前最好离心取上清再进样。
色谱柱堵住的话,只能先用90%水相以0.1流速冲一夜,等压力降下来再换大流速,再用90%有机相冲。
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huangza
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首先检查下是不是哪部分有堵塞的情况,是柱子还是其他?不连柱子看看是不是压力正常就可以排查;如果是色谱柱的问题,可以反冲一下;样品一定要保证前处理干净,进柱子之前过滤膜。
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原文由 huangza(huangza) 发表:首先检查下是不是哪部分有堵塞的情况,是柱子还是其他?不连柱子看看是不是压力正常就可以排查;如果是色谱柱的问题,可以反冲一下;样品一定要保证前处理干净,进柱子之前过滤膜。
连上色谱柱是33MPa,不连色谱柱是3MPa左右,我用纯水:纯甲醇=90%:10%低流速洗了一晚上,感觉柱压稍微降低了些
sdzb1982
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既然是前处理没做好,那有很大的可能就是柱头筛板堵了。
将进样端柱头慢慢拆下来,注意不锈钢筛板,是卡在柱子上?还是在柱头螺母内,仔细取下即可。然后用30%硝酸超声清洗10分钟,再用纯水置换干净,再仔细装上就行。
如果改善不大,那就是柱内填料吸附了脏东西堵了,这个需要用另外不同组合的溶剂去冲洗,你先把柱头处理一下试试,后面看情况再说。
歪果仁zZ
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前处理一定要彻底,如果是沉淀蛋白,甲醇或乙腈的量一定要足够。进样前最好离心取上清再进样。
色谱柱堵住的话,只能先用90%水相以0.1流速冲一夜,等压力降下来再换大流速,再用90%有机相冲。
Insp_f0046f75
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原文由 歪果仁zZ(v3255306) 发表:前处理一定要彻底,如果是沉淀蛋白,甲醇或乙腈的量一定要足够。进样前最好离心取上清再进样。色谱柱堵住的话,只能先用90%水相以0.1流速冲一夜,等压力降下来再换大流速,再用90%有机相冲。
谢谢你的回复,我反冲柱子了,现在95的甲醇,压力3.7MPa,不知道这是不是表明已经冲出脏东西了,没连接检测端
Insp_f0046f75
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原文由 sdzb1982(sepu007) 发表:既然是前处理没做好,那有很大的可能就是柱头筛板堵了。将进样端柱头慢慢拆下来,注意不锈钢筛板,是卡在柱子上?还是在柱头螺母内,仔细取下即可。然后用30%硝酸超声清洗10分钟,再用纯水置换干净,再仔细装上就行。如果改善不大,那就是柱内填料吸附了脏东西堵了,这个需要用另外不同组合的溶剂去冲洗,你先把柱头处理一下试试,后面看情况再说。
谢谢回复。
Insp_f0046f75
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原文由 sdzb1982(sepu007) 发表:既然是前处理没做好,那有很大的可能就是柱头筛板堵了。将进样端柱头慢慢拆下来,注意不锈钢筛板,是卡在柱子上?还是在柱头螺母内,仔细取下即可。然后用30%硝酸超声清洗10分钟,再用纯水置换干净,再仔细装上就行。如果改善不大,那就是柱内填料吸附了脏东西堵了,这个需要用另外不同组合的溶剂去冲洗,你先把柱头处理一下试试,后面看情况再说。
我昨天反冲了柱子,不接检测端的话压力下来了,可接上检测端检测的时候压力又飙上去了……哭死,我怀疑是不是管路堵了,我第一次做液相实验,机器还是借其他实验室的……
sdzb1982
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原文由 Insp_f0046f75(Insp_f0046f75) 发表:我昨天反冲了柱子,不接检测端的话压力下来了,可接上检测端检测的时候压力又飙上去了……哭死,我怀疑是不是管路堵了,我第一次做液相实验,机器还是借其他实验室的……
反冲柱子,不接检测器有多高?接上检测器压力有多高?
接上检测器高,无非就是流通池入口,流通池,流通池出口。做一下分段排查,就能确定出来,压差有多大,是哪里堵了。
反馈问题一定提供有用的信息,关键的信息,能量化,图形化是最好的。
Insp_f0046f75
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原文由 sdzb1982(sepu007) 发表:反冲柱子,不接检测器有多高?接上检测器压力有多高?接上检测器高,无非就是流通池入口,流通池,流通池出口。做一下分段排查,就能确定出来,压差有多大,是哪里堵了。反馈问题一定提供有用的信息,关键的信息,能量化,图形化是最好的。
反冲柱子不接检测器,95%纯甲醇,0.2ml/min,压力3.7;柱子同样反着接,接上检测器,相同流速下压力是10;取下柱子,换成两通,把两端连接起来,其他条件不变,压力是1.3。
sdzb1982
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原文由 Insp_f0046f75(Insp_f0046f75) 发表:反冲柱子不接检测器,95%纯甲醇,0.2ml/min,压力3.7;柱子同样反着接,接上检测器,相同流速下压力是10;取下柱子,换成两通,把两端连接起来,其他条件不变,压力是1.3。
那就说明从柱后管路到废液流出这段堵了(柱后管路,流通池入口,流通池,流通池出口,废液管路),以上这些都是你要去分段排查的,你得一段一段的去排查,才能发现问题。我们只能给你提供思路,结果是要你去发现。我们毕竟不在现场,不会一眼看到问题在哪里。