主题:【分享】细胞冻存的注意事项

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lijing320323
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细胞冻存是细胞培养的关键步骤,一般推荐的冻存液比例为:1:3:6(或1:2:7) 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态良好的细胞进行冻存处理,小编实验室有一个秘密配方,就是10%DMSO和90%的纯血清,这个冻存液有一些奢侈,但是对于一些比较脆弱的细胞,或者是一些冻存条件比较差的实验室(例如没有-80冰箱)有非常良好的效果。

除此之外和大家分享六大注意事项

1、错误的时机:

细胞状态不好(长的太过了,培养液已经很黄;细胞可疑污染;细胞已经开始凋亡或崩解;连续培养超过二个月,细胞性状已有改变改变)。

解决:

最佳时机:细胞增殖旺盛,情况稳定,试验效果良好,复苏后两周内。


2、细胞太少:冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。(复苏很难成功)。

解决:离心后调整细胞浓度。(不要重新洗细胞)。

3、盖子不紧:冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成污染。

解决:选择原配的管子和盖子(不同牌子/型号的颜色会有差别)。

4、单薄的冻存盒:放在-80度的冻存盒,壁太薄,细胞在被迅速降温。

解决:选择厚壁泡沫塑料盒,或塞入大量干棉花。(冻存的原则:缓降!)。

5、-80度太久:放在-80度冰箱的时间超过半年。(冰箱的温度难以恒定:开门/关门,电压不稳等)

解决:尽快转入液氮。
6、液氮不足:液面不能漫过所有细胞。

解决:定期测量液氮储备,保证细胞全部浸在液面下。
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