主题:【分享】【实战宝典】如何测试液相色谱柱的柱效?

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解答:JJG 705-2014《液相色谱仪检定规程》中规定了液相色谱柱柱效的测试方法,具体测试方法如下:

1测试用标准溶液:反相色谱柱测试用的标准溶液为1×10-4g/mL尿嘧啶、 1×10-5g/mL联苯和蒽的甲醇溶液;正相色谱柱测试用的标准溶液为1×10-2mL/mL甲苯和1×10-4 mL/mL硝基苯的正己烷溶液。

2将被测试的色谱柱接到检定合格的液相色谱仪器上,反相柱用甲醇+85%+15%为流动相,正相柱用正己烷+异丙醇99.5%+0.5%为流动相,流速为1mm/s 内径为4.6 mm色谱柱,流量为1.0mL/min,紫外检测器波长为254 nm,灵敏度选择适中。仪器稳定后,从进样口注入10μL对应的色谱柱测试标准溶液,记录色谱图。

3柱效(理论塔板数)和色谱峰对称性的计算

由式 2-1计算液相色谱柱柱效理论塔板数,重复测量3次,取平均值。

    2-1

式中n理论塔板数tR色谱峰的保留时间,时间测量需精确到0.02min

色谱峰半高峰宽L色谱柱长

按照上述条件测得的色谱图中,按式2-2计算色谱峰的不对称因子As

As =b/α                             2-2

式中ab分别为通过峰高处、平行于峰底的直线被峰两侧及峰高截取的两线段的长度

4液相色谱柱性能要求

柱效:反相色谱柱的理论塔板数一般在3~4×104m-1范围内,正相色谱柱的理论塔板数在4~5×104m-1范围内。

色谱峰对称性:被测峰的不对称因子As一般在0.8~1.6范围内。

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