主题:【已应助】金针菇、鹰嘴桃、绿茶农残加标回收率偏差较大 求大佬指点

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水果、茶叶、食用菌中57种农残检测实验问题总结

一、实验前处理方面的问题

鹰嘴桃前处理方法举例

(1)称取10g样品于50mL离心管中,(加完标后是否需要放置过夜使其充分吸收还是直接进行样品处理?)加入20mL乙腈,均质15000r/min,匀浆

1min,加入5g氯化钠,匀浆1min,3000r/min离心5min,取上清10mL,待净化;

在取上清液时,蔬菜水果和食用菌的方法都有固定的取样体积,但茶叶方法中没有明说取多少,且匀浆离心后的上层液浑浊,表面漂有渣滓,后经商讨取的是偏中间的液体,未取完上层液。

(2)10mL乙腈预洗ENvi-18柱,下接鸡心瓶,将样品过柱,并用15mL乙腈洗涤柱,收集液40度水浴旋蒸浓缩至约1mL,备用。

(3)Envi-Carb柱中加入2cm高无水硫酸钠,连接至Sep-Pak氨丙基柱顶部,下接鸡心瓶;

无水硫酸钠应是加一个柱过一个柱,我们是都加好了再一起过柱,这样其他柱中的无水硫酸钠长时间暴露在空气中,会影响它的吸水效果.

(4)先用4mL乙腈-甲苯(3+1)预洗至润透硫酸钠时,迅速加样,再用2mL乙腈-甲苯溶液三次洗涤样品瓶并转移至柱中;

用乙腈-甲苯溶液洗涤样品瓶时我们应用漩涡混匀仪对鸡心瓶中接触过的样品的部分进行充分的洗涤,而不是手摇荡洗了事。

(5)在柱上加50mL贮液器,用25mL乙腈-甲苯溶液洗涤串联柱,收集液于40度水浴旋蒸浓缩至0.5mL。

这一步有不少问题。首先是贮液器的问题,这个贮液器虽然我们没有,但也不是特别需要,以后有强需了可以再考虑;然后是过柱装置的问题,我们的固相萃取装置仅适用于15mL的离心管,因为这次需要用到鸡心瓶,显然是放不进固相萃取装置的,所以我们只好把柱子搭在鸡心瓶瓶口,用架子固定鸡心瓶进行过柱。

最后是过柱流速控制的问题,若不控制流速,样液和洗涤液快的几分钟就过完了,这样过完柱的样液和过柱前的样液区别不大。因为在茶叶的样液过柱时,虽然部分样液过完柱是透明的,但也有部分样液过完柱后仍是黄绿色的,之后浓缩时还会出现油性物质,所以无论什么情况下,在过柱时我们都应该考虑过柱流速控制的问题。我们下次就可以考虑利用固相萃取装置配套的活塞流液口来控制流速,使样液和洗涤液在填料中充分浸泡除杂后再流出。

(6)加入5mL正己烷在40度水浴旋蒸蒸发,进行溶剂交换两次,最后使样品溶液体积约为1mL,加入40μL内标,混匀待测。

刚开始旋蒸时,旋蒸一个样品需要25分钟,之后越来越慢,慢至1小时才能蒸完一个。次日再旋蒸时,旋蒸一个样品的速度又恢复25分钟一个了。这个问题上一次长时间旋蒸时也出现过,但仍未解决。

最后一步我们修改了操作:在加入5mL正己烷,进行第一次溶剂交换前,旋蒸至2mL左右,再转移至10mL带刻度的离心管中。把第一次溶剂交换用的5mL正己烷来分次洗涤鸡心瓶,洗涤液并入离心管中,用氮吹浓缩至约1mL后,再把第二次溶剂交换用的5mL正己烷加到离心管中,浓缩至约1mL,加上内标后待测。实际上我们在这氮吹浓缩中,将样品浓缩到了离心管1mL的刻度线下,再用正己烷在离心管中定容至1mL刻度线,最后再用1mL的注射器配合有机相针孔滤器将离心管中的样液转移至进样瓶中,但因为注射器一次取不完样液,分次取了后就损失了一些样液,所以实际操作中,定容和转移这步是存在问题,需要讨论解决的

57种农残种类及定量限

二、仪器数据处理方面的问题

1 批处理方法的建立

定量数据处理时都需要先建一个批处理方法。每次检测的农残数量多时,在建批处理方法这一步就要花很多时间。即使是用同一批农残,前后做了两次实验,不同的标曲,也要建两个不同的批处理方法,批处理方法还不能通用于这两个实验,这就更耗时间了。这个问题可以考虑有没有其他可以节省批处理方法建立的时间。

2 建立批处理方法时的定量、定性离子的选择

选择化合物的定量离子有两种方法,一是通过筛选批处理自动检索出的离子,二是手动在色谱图中选中对应的色谱峰定量离子。第一种方法的好处是比较客观,也省去了找离子的步骤,坏处是在两个相同的离子中,只会出现RT较早的离子,这样容易找不到离子;第二种方法的好处是能找全所有的离子,坏处是主观性太强。在色谱峰明显且响应较高的化合物中选择峰高处的离子就好,但遇到响应不高的化合物时,就不好选择定量离子了,也会出现定量离子的质荷比比定性离子的质荷比低的情况。定量离子是否选得合适,定性离子质荷比是否和标准相近,这两点是会影响样品能否按照定量标准处理或是否能找到对应的定性离子进行正确的数据处理。

3 标准曲线每个点的选择

在定量数据处理软件上,是可以选择使用标准曲线上哪些点的,所以当标曲数据与预设标曲数据不匹配时,可以通过取消使用不匹配的标曲点,使整条标曲数据接近预设的标曲数据,这样处理出的数据也是较合理的。

4 整个实验操作流程加标方法及57种农残的回收率,见附件

最佳答案:歌名回复于2021/04/17
感觉做完这些确认,你都可以去搞一个原创了。

给这么几个建议给你参考哈

1.“加完标后是否需要放置过夜使其充分吸收还是直接进行样品处理?”这个要看你是做什么样,做能力验证、盲样测试考虑提前加标,而且不是加标过夜,组好是要根据你的盲样加标时间加标,其实就是想保持一致,平时做样没必要了。

2.“无水硫酸钠应是加一个柱过一个柱,我们是都加好了再一起过柱,这样其他柱中的无水硫酸钠长时间暴露在空气中,会影响它的吸水效果”,无水硫酸钠不用直接加在小柱上,少量加在浓缩液中,摇匀即可。

3.“

用乙腈-甲苯溶液洗涤样品瓶时我们应用漩涡混匀仪对鸡心瓶中接触过的样品的部分进行充分的洗涤,而不是手摇荡洗了事。

(5)在柱上加50mL贮液器,用25mL乙腈-甲苯溶液洗涤串联柱,收集液于40度水浴旋蒸浓缩至0.5mL

”涡旋混匀更充分。

4.“这一步有不少问题。首先是贮液器的问题,这个贮液器虽然我们没有,但也不是特别需要,以后有强需了可以再考虑;然后是过柱装置的问题,我们的固相萃取装置仅适用于15mL的离心管,因为这次需要用到鸡心瓶,显然是放不进固相萃取装置的,所以我们只好把柱子搭在鸡心瓶瓶口,用架子固定鸡心瓶进行过柱”换25ml离心管就可以,最后是要抽干的,用鸡心瓶接受最后抽干要手动一个一个操作,效率太低。

5.“最后是过柱流速控制的问题,若不控制流速,样液和洗涤液快的几分钟就过完了,这样过完柱的样液和过柱前的样液区别不大。因为在茶叶的样液过柱时,虽然部分样液过完柱是透明的,但也有部分样液过完柱后仍是黄绿色的,之后浓缩时还会出现油性物质,所以无论什么情况下,在过柱时我们都应该考虑过柱流速控制的问题。我们下次就可以考虑利用固相萃取装置配套的活塞流液口来控制流速,使样液和洗涤液在填料中充分浸泡除杂后再流出”萃取装置下面有流量控制阀,一定要调节好流速采上样,否则吸附效果很差,损失率大,回收率低,杂质多,都可能,流速一般控制1滴/s。

很多茶叶的前处理液即使处理好了也会有颜色(之前做过红茶深有体会)。

6.“刚开始旋蒸时,旋蒸一个样品需要25分钟,之后越来越慢,慢至1小时才能蒸完一个。次日再旋蒸时,旋蒸一个样品的速度又恢复25分钟一个了。这个问题上一次长时间旋蒸时也出现过,但仍未解决

在你旋蒸速度肯定是不行的,基本做不了样品,旋蒸正常也就三五分钟一个样品。旋蒸慢的原因有这么几个自己回去对一下:a,冷却液不够低温快速,旋蒸有机溶剂一般是沸点低,旋蒸开始蒸汽上升快,冷却液不够,一个是导致旋蒸腔内很容易蒸汽饱和,更致命的是溶剂蒸汽沿着管路进泵腔(除了机械泵,大部分的泵溶剂耐受度有限,经常这样干容易坏泵)最后导致旋蒸以内腔负压不够。b,旋蒸水分太多,水的沸点高,旋蒸水是比较麻烦的事,水多慢是肯定的。c,系统漏气,旋蒸内腔负压不够旋蒸自然就慢。

处理方式也多,添加冷阱,制冷机(旋蒸有机溶剂很有必要),除水等。
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过小柱有个开关,可以控制流速,下周拍个照。
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原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:过小柱有个开关,可以控制流速,下周拍个照。
洗脱液加起来有31mL,我们的固相萃取装置最大只能放15mL的管,所以我们是直接放在100mL鸡心瓶上面过的
歌名
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感觉做完这些确认,你都可以去搞一个原创了。

给这么几个建议给你参考哈

1.“加完标后是否需要放置过夜使其充分吸收还是直接进行样品处理?”这个要看你是做什么样,做能力验证、盲样测试考虑提前加标,而且不是加标过夜,组好是要根据你的盲样加标时间加标,其实就是想保持一致,平时做样没必要了。

2.“无水硫酸钠应是加一个柱过一个柱,我们是都加好了再一起过柱,这样其他柱中的无水硫酸钠长时间暴露在空气中,会影响它的吸水效果”,无水硫酸钠不用直接加在小柱上,少量加在浓缩液中,摇匀即可。

3.“

用乙腈-甲苯溶液洗涤样品瓶时我们应用漩涡混匀仪对鸡心瓶中接触过的样品的部分进行充分的洗涤,而不是手摇荡洗了事。

(5)在柱上加50mL贮液器,用25mL乙腈-甲苯溶液洗涤串联柱,收集液于40度水浴旋蒸浓缩至0.5mL

”涡旋混匀更充分。

4.“这一步有不少问题。首先是贮液器的问题,这个贮液器虽然我们没有,但也不是特别需要,以后有强需了可以再考虑;然后是过柱装置的问题,我们的固相萃取装置仅适用于15mL的离心管,因为这次需要用到鸡心瓶,显然是放不进固相萃取装置的,所以我们只好把柱子搭在鸡心瓶瓶口,用架子固定鸡心瓶进行过柱”换25ml离心管就可以,最后是要抽干的,用鸡心瓶接受最后抽干要手动一个一个操作,效率太低。

5.“最后是过柱流速控制的问题,若不控制流速,样液和洗涤液快的几分钟就过完了,这样过完柱的样液和过柱前的样液区别不大。因为在茶叶的样液过柱时,虽然部分样液过完柱是透明的,但也有部分样液过完柱后仍是黄绿色的,之后浓缩时还会出现油性物质,所以无论什么情况下,在过柱时我们都应该考虑过柱流速控制的问题。我们下次就可以考虑利用固相萃取装置配套的活塞流液口来控制流速,使样液和洗涤液在填料中充分浸泡除杂后再流出”萃取装置下面有流量控制阀,一定要调节好流速采上样,否则吸附效果很差,损失率大,回收率低,杂质多,都可能,流速一般控制1滴/s。

很多茶叶的前处理液即使处理好了也会有颜色(之前做过红茶深有体会)。

6.“刚开始旋蒸时,旋蒸一个样品需要25分钟,之后越来越慢,慢至1小时才能蒸完一个。次日再旋蒸时,旋蒸一个样品的速度又恢复25分钟一个了。这个问题上一次长时间旋蒸时也出现过,但仍未解决

在你旋蒸速度肯定是不行的,基本做不了样品,旋蒸正常也就三五分钟一个样品。旋蒸慢的原因有这么几个自己回去对一下:a,冷却液不够低温快速,旋蒸有机溶剂一般是沸点低,旋蒸开始蒸汽上升快,冷却液不够,一个是导致旋蒸腔内很容易蒸汽饱和,更致命的是溶剂蒸汽沿着管路进泵腔(除了机械泵,大部分的泵溶剂耐受度有限,经常这样干容易坏泵)最后导致旋蒸以内腔负压不够。b,旋蒸水分太多,水的沸点高,旋蒸水是比较麻烦的事,水多慢是肯定的。c,系统漏气,旋蒸内腔负压不够旋蒸自然就慢。

处理方式也多,添加冷阱,制冷机(旋蒸有机溶剂很有必要),除水等。
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旋蒸时有真空吗?有真空很快的。贮液器是个大针管,很好用的,也便宜。下周我拍个照片。
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原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:旋蒸时有真空吗?有真空很快的。贮液器是个大针管,很好用的,也便宜。下周我拍个照片。
我们用的是水泵,有一个表显示真空度,我们有仔细观察真空度都很稳定,下个星期我拍照放上来 谢谢你
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原文由 歌名(Ins_eedcdc41) 发表:感觉做完这些确认,你都可以去搞一个原创了。给这么几个建议给你参考哈1.“加完标后是否需要放置过夜使其充分吸收还是直接进行样品处理?”这个要看你是做什么样,做能力验证、盲样测试考虑提前加标,而且不是加标过夜,组好是要根据你的盲样加标时间加标,其实就是想保持一致,平时做样没必要了。2.“无水硫酸钠应是加一个柱过一个柱,我们是都加好了再一起过柱,这样其他柱中的无水硫酸钠长时间暴露在空气中,会影响它的吸水效果”,无水硫酸钠不用直接加在小柱上,少量加在浓缩液中,摇匀即可。3.“用乙腈-甲苯溶液洗涤样品瓶时我们应用漩涡混匀仪对鸡心瓶中接触过的样品的部分进行充分的洗涤,而不是手摇荡洗了事。(5)在柱上加50mL贮液器,用25mL乙腈-甲苯溶液洗涤串联柱,收集液于40度水浴旋蒸浓缩至0.5mL”涡旋混匀更充分。4.“这一步有不少问题。首先是贮液器的问题,这个贮液器虽然我们没有,但也不是特别需要,以后有强需了可以再考虑;然后是过柱装置的问题,我们的固相萃取装置仅适用于15mL的离心管,因为这次需要用到鸡心瓶,显然是放不进固相萃取装置的,所以我们只好把柱子搭在鸡心瓶瓶口,用架子固定鸡心瓶进行过柱”换25ml离心管就可以,最后是要抽干的,用鸡心瓶接受最后抽干要手动一个一个操作,效率太低。5.“最后是过柱流速控制的问题,若不控制流速,样液和洗涤液快的几分钟就过完了,这样过完柱的样液和过柱前的样液区别不大。因为在茶叶的样液过柱时,虽然部分样液过完柱是透明的,但也有部分样液过完柱后仍是黄绿色的,之后浓缩时还会出现油性物质,所以无论什么情况下,在过柱时我们都应该考虑过柱流速控制的问题。我们下次就可以考虑利用固相萃取装置配套的活塞流液口来控制流速,使样液和洗涤液在填料中充分浸泡除杂后再流出”萃取装置下面有流量控制阀,一定要调节好流速采上样,否则吸附效果很差,损失率大,回收率低,杂质多,都可能,流速一般控制1滴/s。很多茶叶的前处理液即使处理好了也会有颜色(之前做过红茶深有体会)。6.“刚开始旋蒸时,旋蒸一个样品需要25分钟,之后越来越慢,慢至1小时才能蒸完一个。次日再旋蒸时,旋蒸一个样品的速度又恢复25分钟一个了。这个问题上一次长时间旋蒸时也出现过,但仍未解决”在你旋蒸速度肯定是不行的,基本做不了样品,旋蒸正常也就三五分钟一个样品。旋蒸慢的原因有这么几个自己回去对一下:a,冷却液不够低温快速,旋蒸有机溶剂一般是沸点低,旋蒸开始蒸汽上升快,冷却液不够,一个是导致旋蒸腔内很容易蒸汽饱和,更致命的是溶剂蒸汽沿着管路进泵腔(除了机械泵,大部分的泵溶剂耐受度有限,经常这样干容易坏泵)最后导致旋蒸以内腔负压不够。b,旋蒸水分太多,水的沸点高,旋蒸水是比较麻烦的事,水多慢是肯定的。c,系统漏气,旋蒸内腔负压不够旋蒸自然就慢。处理方式也多,添加冷阱,制冷机(旋蒸有机溶剂很有必要),除水等。
首先,感谢您对我问题的分析,针对您提出的6点我做出以下答复,请查看谢谢
1、加标这个那我们还是按原来的进行。
2、将无水硫酸钠直接加入到浓缩液会不会造成标品损失之类的,毕竟量只有1mL左右。
3、这个我们现在使用的涡旋混合仪。
4、过完小柱后自然流干不行么?还是必须要求使用外力抽干?假如是,是否会破坏里面的填料?
5、还是那个问题,我们的固相萃取装置最大只能放15mL的离心管,这里可以采购一个新的,因此这个问题可以解决。
6、我们使用的是水泵,没有冷却液,您所说的冷阱和制冷机我们没听说过,也不知道如何配合旋转蒸发仪使用,方便的话是否可以拍个照片?谢谢你,我们的是纯有机相因此不存在除水的问题。
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认真看了你的样品的加标回收率:我感觉像你的这种结果出现这么大的偏差的,应该还是出再你的定量的工作点的问题上,我们再做加标回收试验时先是用STD-1000ng/mL的先走,样品基质比如金针菇的一起走样液,然后再测一针的回标STD-1000ng/mL,记住一定要使用这个回标来定量,你堆栈质谱图的时候会发现第一针的STD-1000ng/mL与进完一批金针菇的样液再进一针的回标STD-1000ng/mL峰面积相差是比较大的,接着再进一批的鹰嘴桃,再进一针的回标,用回标定量,以此类推,你可以先试试下,
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STD-1000ng/mL指的是样品加标么还是?
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原文由 萧翊柏(Insm_9093080c) 发表:
首先,感谢您对我问题的分析,针对您提出的6点我做出以下答复,请查看谢谢
1、加标这个那我们还是按原来的进行。
2、将无水硫酸钠直接加入到浓缩液会不会造成标品损失之类的,毕竟量只有1mL左右。
3、这个我们现在使用的涡旋混合仪。
4、过完小柱后自然流干不行么?还是必须要求使用外力抽干?假如是,是否会破坏里面的填料?
5、还是那个问题,我们的固相萃取装置最大只能放15mL的离心管,这里可以采购一个新的,因此这个问题可以解决。
6、我们使用的是水泵,没有冷却液,您所说的冷阱和制冷机我们没听说过,也不知道如何配合旋转蒸发仪使用,方便的话是否可以拍个照片?谢谢你,我们的是纯有机相因此不存在除水的问题。


过完小柱一最后一般不会让他自然流干就完事,柱内还会残留,如果是萃取装置就抽干,没连接萃取装置用注射器打空气进去把柱内残留挤出。

旋蒸肯定是要有冷凝水/冷却液的呀,普通的也就是用水冷凝,有机的话水冷是有点不够的,就需要使用制冷机制冷机大致就这样(其实就是跟冰箱差不多,制冷机一般用硅油或者乙二醇,可以外接需要冷凝设备),冷阱的没有卖的一般是自己设置保护泵的,这个设置几句话就说不清了,你可以参考一下安全瓶的设置,晚上看看先