主题:【已应助】关于药动学的实验设计求助

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仪器是安捷伦6460的液质,刚研一,第一次做药动,求各位老师指导
最佳答案:歪果仁zZ回复于2021/05/05
我觉得你没必要做稀释方法学。没有必要在样品提取前把样品稀释,而是在样品处理后,进样前将溶液稀释即可,且处理的样品与标曲同样操作即可。例如取100血加300乙腈沉淀,离心取上清10微升加初始流动相990微升。
看了你的药动方案,不知道mg级别的药物静注大鼠会不会中毒,注射的体积和浓度是需要考量的。
该帖子作者被版主 hujiangtao5积分, 2经验,加分理由:鼓励发帖
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hujiangtao
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感觉吸取10ul样品有点少,容易造成比较大误差,我们一般吸50ul左右平行还可以
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
感觉吸取10ul样品有点少,容易造成比较大误差,我们一般吸50ul左右平行还可以


谢谢老师,我这边改了以下方案,能麻烦您帮忙看看吗?

标曲点设置:

体内血药浓度最大不超过0.1mg/ml(100ug/ml),按照网上求助经验,按照该给药方案,体内血药浓度最大不超过30ppm(可以通过后续最早的采血点血样进行验证,如果不够,标曲浓度做大即可),因此标曲可以设置为:
50ppm, 20ppm, 10ppm, 5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm, 0.1ppm, 0.05ppm (最高血药浓度点和最低点倍数关系1000倍),但是此浓度太大,不适合进样仪器,需要对标曲进行稀释10倍,得:


5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm, 0.1ppm, 0.05ppm, 0.02ppm, 0.01ppm,0.005ppm

标曲液的配制:

1、  工作液的准备:量取10mg奥美拉唑和右美沙芬,并取一支(规格2ml,5mg/ml)咪达唑仑,共同溶于10ml容量瓶,制得1mg/ml的工作液,然后根据此工作液稀释出以下浓度的混标工作液:

400ug/ml, 200ug/ml, 100ug/ml, 40ug/ml, 20ug/ml,10ug/ml,4ug/ml, 2ug/ml, 1ug/ml

2、取空白血190ul,用移液枪分别移取1mg/ml,400ug/ml, 200ug/ml, 100ug/ml,40ug/ml, 20ug/ml, 10ug/ml, 4ug/ml, 2ug/ml, 1ug/ml的工作液10ul,涡旋混匀 (此时三种药物浓度梯度变成50ug/ml, 20 ug/ml, 10 ug/ml, 5 ug/ml,2 ug/ml, 1 ug/ml, 0.5 ug/ml, 0.2ug/ml, 0.1 ug/ml, 0.05 ug/ml),从上述血样中,取100ul,加入5ul内标(浓度10ug/ml),再加入895ul乙腈,涡旋5min,在12000r/min下离心10min,取上清液进样(此时浓度分别稀释了10倍:5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm,0.1ppm, 0.05ppm, 0.02ppm, 0.01ppm, 0.005ppm),红色部分即为样本血浆的前处理方式。
歪果仁zZ
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我觉得你没必要做稀释方法学。没有必要在样品提取前把样品稀释,而是在样品处理后,进样前将溶液稀释即可,且处理的样品与标曲同样操作即可。例如取100血加300乙腈沉淀,离心取上清10微升加初始流动相990微升。
看了你的药动方案,不知道mg级别的药物静注大鼠会不会中毒,注射的体积和浓度是需要考量的。
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原文由 歪果仁zZ(v3255306) 发表:我觉得你没必要做稀释方法学。没有必要在样品提取前把样品稀释,而是在样品处理后,进样前将溶液稀释即可,且处理的样品与标曲同样操作即可。例如取100血加300乙腈沉淀,离心取上清10微升加初始流动相990微升。看了你的药动方案,不知道mg级别的药物静注大鼠会不会中毒,注射的体积和浓度是需要考量的。
老师,请问“取100ul血,加300ul乙腈沉淀,离心后取10ul上清液,加流动相990ul”这个血浆中药物稀释倍数算多少倍呢?30倍还是10倍?
歪果仁zZ
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原文由 Ins_d5c5f5a8(Ins_d5c5f5a8) 发表:老师,请问“取100ul血,加300ul乙腈沉淀,离心后取10ul上清液,加流动相990ul”这个血浆中药物稀释倍数算多少倍呢?30倍还是10倍?
后面稀释是100倍,前面加的乙腈可以少点体积方便计算
宇哲实验设备
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我是安徽宇哲实验设备科技有限公司的 专门生产销售: 实验边台 中央台 通风柜 器皿柜 气瓶柜 实验室设施 联系电话15755095288
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原文由 Ins_d5c5f5a8(Ins_d5c5f5a8) 发表: 谢谢老师,我这边改了以下方案,能麻烦您帮忙看看吗?标曲点设置:体内血药浓度最大不超过0.1mg/ml(100ug/ml),按照网上求助经验,按照该给药方案,体内血药浓度最大不超过30ppm(可以通过后续最早的采血点血样进行验证,如果不够,标曲浓度做大即可),因此标曲可以设置为:50ppm, 20ppm, 10ppm, 5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm, 0.1ppm, 0.05ppm (最高血药浓度点和最低点倍数关系1000倍),但是此浓度太大,不适合进样仪器,需要对标曲进行稀释10倍,得:5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm, 0.1ppm, 0.05ppm, 0.02ppm, 0.01ppm,0.005ppm标曲液的配制:1、    工作液的准备:量取10mg奥美拉唑和右美沙芬,并取一支(规格2ml,5mg/ml)咪达唑仑,共同溶于10ml容量瓶,制得1mg/ml的工作液,然后根据此工作液稀释出以下浓度的混标工作液:400ug/ml, 200ug/ml, 100ug/ml, 40ug/ml, 20ug/ml,10ug/ml,4ug/ml, 2ug/ml, 1ug/ml2、取空白血190ul,用移液枪分别移取1mg/ml,400ug/ml, 200ug/ml, 100ug/ml,40ug/ml, 20ug/ml, 10ug/ml, 4ug/ml, 2ug/ml, 1ug/ml的工作液10ul,涡旋混匀 (此时三种药物浓度梯度变成50ug/ml, 20 ug/ml, 10 ug/ml, 5 ug/ml,2 ug/ml, 1 ug/ml, 0.5 ug/ml, 0.2ug/ml, 0.1 ug/ml, 0.05 ug/ml),从上述血样中,取100ul,加入5ul内标(浓度10ug/ml),再加入895ul乙腈,涡旋5min,在12000r/min下离心10min,取上清液进样(此时浓度分别稀释了10倍:5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm,0.1ppm, 0.05ppm, 0.02ppm, 0.01ppm, 0.005ppm),红色部分即为样本血浆的前处理方式。
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