主题:【已应助】新人求问安捷伦1260液相色谱生长素脱落酸和赤霉素

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液相条件采用甲醇:1%冰乙酸=60:40 流速0.8 波长254nm柱温35,这个条件测生长素和脱落酸的标样都非常好,但是测赤霉素不出峰,调整过流动相甲醇的比例分别为70 80之后还是不出峰,后来打技术电话说是波长问题,但是调到210nm时又出现基线不稳的现象,调到254nm基线就又稳了,这到底是什么原因呢?还是我应该选择别的液相条件重新测呢?
最佳答案:myoldid回复于2021/06/23
210nm属于低波长端,使用甲醇,乙腈这些流动相确实会发生基线 不稳的情况,如果甲醇,乙腈纯度不够,脱气机效率不好的时候,更容易出现。你说的赤霉酸到底是哪一个呢?A3,A4,A7?常见的A4出峰会比A3,A7要早一些,甲醇+磷酸水=65+35,安捷伦SB-C18 250的柱子下,A3+A7在12min前出峰。你可以设置为在生长素和脱落酸出峰完后,提高甲醇比例,同时通过检测器的时间程序切换波长为210nm

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myoldid
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210nm属于低波长端,使用甲醇,乙腈这些流动相确实会发生基线 不稳的情况,如果甲醇,乙腈纯度不够,脱气机效率不好的时候,更容易出现。你说的赤霉酸到底是哪一个呢?A3,A4,A7?常见的A4出峰会比A3,A7要早一些,甲醇+磷酸水=65+35,安捷伦SB-C18 250的柱子下,A3+A7在12min前出峰。你可以设置为在生长素和脱落酸出峰完后,提高甲醇比例,同时通过检测器的时间程序切换波长为210nm

~独一无二~
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甲醇的截止波长是205nm,你用210nm测样基线不稳定正常。测样波长和流动相截止波长小于20nm,有时候样品会出负峰。可以的话要么改变测样波长,要么用乙腈试试,乙腈截止波长190nm