主题:【第十四届原创】顺铂的细胞毒性实验及细胞形态学观察

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顺铂的细胞毒性实验及细胞形态学观察

1)当H1299细胞融合到80%-90 %左右,消化处理细胞并计数。将H1299细胞以105/孔的比例接种到96孔板中,保证细胞分布均匀,培养过夜使细胞壁。

2)分别配置01101001000 μM含顺铂培养基,沿着侧壁加入到96孔板中,每孔200 μL,每个浓度设置6个复孔。96孔板外围加入100 μL PBS缓冲液,防止边缘效应

3)将96孔板放入培养箱培养3天后,用倒置相差显微镜观察细胞形态并拍照。

4)用MTS法测定细胞活力,每孔加入20 μL MTS试剂,全程避光,继续培养3 h。利用酶标仪490 nm波长检测各孔OD值。用ODtreat/ODcontrol表征细胞活力,计算细胞活力。细胞活力测定数据是基于三次独立的实验。

在细胞迁移过程中,细胞内上皮间充质转化(EMT)相关蛋白的表达量会发生相应的变化。为了检测外体与细胞孵育时间对EMT相关蛋白的影响,实验测定了加入1010个外体颗粒后细胞134EMT相关蛋白的表达变化。如图所示,E-Cad蛋白的表达量在第3天逐渐减少至最初0.7倍。N-CadVimentin蛋白在第3天的表达量分别增加了1.5倍和1.4倍。以上结果说明与细胞共培养3天后,细胞内EMT相关蛋白变化更为显著。

1体与H1299细胞孵育时间对EMT相关蛋白的影响



为了进一步在蛋白水平上验证外体可以促进细胞迁移,我们提取共育3天的细胞蛋白质,检测EMT相关蛋白的表达变化。实验结果显示,随着外体浓度的增加,E-Cad蛋白表达降低,而N-Cad蛋白和Vimentin蛋白表达增加。上述结果可进一步证明捕获的外体可以诱导细胞迁移具有良好的生物活性。
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