主题:【分享】[新手]+高效液相色谱日常维护和保养

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高效液相色谱一种精密分离分析仪器高压输液系统将单一溶剂或混合溶剂等流动相入色谱柱,被测组分经分离后,进入检测器进行定性定量分析检测。该设备已成为学科领域中重要的分离分析的手段之一

高效液相色谱在实验室中使用频率很高,而且在使用过程中容易出现各种故障,因此在日常使用该设备时,必须要掌握常规维护及保养方法,而且当仪器出现故障时,需要通过经验进行排查,尽快恢复正常。

1、 高压输液泵的维护与保养

1高压输液泵能够为色谱体系提供稳定流速,实验中能够保证分析的稳定与重现。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成,长时间往复运行,容易造成柱塞磨损,因此实验中需要保证柱塞清洗液充足并且洁净

2、实验完成后运行冲洗程序保证流路和高压泵清洗干净,保证泵的正常使用寿命。

二、进样前准备

1、流动相使用色谱纯试剂,用二次蒸馏水,如果使用缓冲盐必须完全溶解后用0.45μm滤膜过滤

2样品提取溶液进样前必须0.45μm以下滤膜进行过滤

三、色谱柱使用

1、色谱柱使用前需按照使用说明进行冲洗,使流速由低到高逐渐升高,当压力稳定后才能正常使用。

2、应按照色谱柱使用说明设置适宜流速,一般最大流速不超过1.5 mL/min,当压力稳定后再执行进样操作

4、样品分析完成后,需要用流动相梯度冲洗色谱柱,最终使色谱柱保存在适宜的流动相中,一般为高比例有机相

四、常见问题及解决方法

1、压力问题

压力过高是高效液相在使用中最常见的问题。

一般都是由于流路中有堵塞的原因应该分段进行检查。

(1)首先断开高压泵入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。解决方案30%的硝酸浸泡半个小时,用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,再执行以下检查;

(2)打开Purge阀,使流动相直接进废液,如果压力没有明显下降,则可能是过滤头堵塞。

解决方案:将过滤头取出,用10%异丙醇超声半小时。如果压力降至100psi以下,正常,继续执行以下检查;

(3)色谱柱出口端断开,如果压力不下降,则是柱子堵塞。

解决方案则需对色谱柱进行冲洗或反接如果问题压力仍然高则可考虑更换色谱柱。

压力过低,也属于常见的压力异常问题。

(1)一般是泄露造成了压力低,查找泄露点,紧固即可。

(2)流动相抽空,进入了空气,可能造成压力不稳,忽高忽低,更严重一点会导致泵无法吸上液体。一般进行大流速灌注管路即可,如果不行,用专用针筒借住外力将流动相吸出

(3)purge阀未关闭purge完后将阀及时关闭,不然也可能造成压力低

2基线问题

基线漂移是我们经常能遇到的情况特别是在梯度洗脱的时候。一般说来,仪器刚开始运行时,基线容易漂移,一般进行前需要平衡系统至少半小时

(1)柱温波动柱温箱控制温度不准确也会造成基线漂移。

(2)流动相污染、变质或由低品质溶剂配成均可能导致基线漂移

基线噪音对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30 min以上,基线才能稳定。氘灯用的过久,会使基线噪音明显增加应及时更换氘灯。除光源外流路中的气泡也会产生噪音。对于判断基线噪声增大是由于光源灯的老化还是来自流路中的气泡的问题,可将泵关上,继续走基线,如果噪声立即停止,基线呈一条直线,说明基线噪声来自流动相中的气泡,应设法排气;若停泵后仍有噪音出现,应考虑是灯的问题。

在实际使用仪器过程中,可能会遇到很多的问题,自己勤于思考,多积累,多向工程师请教,久而久之,相信各位也会成为仪器使用大师!
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dahua1981
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