主题:【分享】新方法(液相)

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我正在不断开发新的HPLC方法,这些方法的版本将用于多种用途。大多数时候,主要目标是建立新原料药的杂质分布。这些方法的版本将用于溶出度测试或稳定性测试,最终将使用简化的版本来测试含量均匀性。当前,这些方法在部门之间移动时经常被重新发明,是否有一种方法可以简化此过程?

答:这是一个既有技术成分又有管理成分的难题。让我们在这里讨论一下技术部分吧!

您描述的任务向我暗示您正在从事制药行业。一些答案可能是特定于您的行业的,但是我确信其他行业也存在类似的问题。不过,我将在制药业的背景下解决您的问题。方法中的杂质分布通常需要解析大量化合物。分析时间通常不是一个因素,因为这种分析只是偶尔进行一次。另一方面,在溶出度测试中,您只对单个峰感兴趣,并且希望拥有一种具有良好色谱柱寿命的快速方法。两种类型的分析需求之间的差异很大,原则上,有您所谓的“重新发明”该方法的充分理由。

此过程的某些组件可以简化,并可以进行实际优化。首先,您需要确定一个色谱柱系柱,其中许多不同的色谱柱配置都提供相同的填料。原则上,这应该不难,因为几乎所有的色谱柱供应商都具有大量的色谱柱配置。例如,沃特世公司(Waters Corp.)的XTerra?系柱色谱柱(1)包含270多个零件号。大量的柱配置应允许您根据不同部门的不同需求选择正确的柱。

接下来,您应该选择适合于生成杂质分布的色谱柱配置。这通常是最复杂的分析类型。幸运的是,也是项目中最早需要的分析。因此,可以从为杂质分布图开发的方法中得出其他方法。

杂质分布图的方法开发通常是最艰巨的任务。通常,使用具有最佳分离能力的色谱柱(填充有小颗粒的长色谱柱)。在大多数情况下,梯度洗脱是获得所有可能杂质的合理色谱图的唯一方法。还需要对具有复杂洗脱特征的方法进行加固:您需要证明可以使用不同部门中的不同色谱柱和不同仪器来实现该方法的结果。好消息是,开发了用于杂质分布图的方法的人已经做了大量的功课,可用于后续方法的开发。此知识可以在同一部门或其他部门中用于更简单的方法。

如何从这种复杂的杂质分析方法转变为更简单的方法?在某些情况下,人们只是使用同一根色谱柱,并针对其他需求(例如,内容均匀性测试)开发了等度分离。一方面,使用相同的填充材料有其优点。毕竟,对杂质分布的研究只是确定了使用该填充方法可重现该方法。另一方面,对于简单的两峰色谱图,不需要高分辨率的色谱柱。可以在较短的色谱柱中使用相同的填料以加快分离速度。或者可以使用较短的色谱柱,该色谱柱装有较大粒径的相同填料,以提高该方法的耐用性。

如果您掌握正确的信息,那么从复杂的梯度方法到简单的等度方法的路径可能会非常快速和直接。您需要确定在梯度方法中母峰在哪种溶剂组分上洗脱。换句话说,您需要知道洗脱母峰时柱出口处的确切溶剂组成。这需要您对仪器有充分的了解,因为在形成梯度的时间与到达色谱柱出口(2)的时间之间会有一定的延迟。您需要知道仪器的梯度延迟体积和色谱柱的死体积。色谱柱的死体积很容易获得:您只需注入一个未保留的峰,例如反相色谱柱的二羟基丙酮。仪器的梯度延迟体积是通过使用紫外线吸收剂运行梯度获得的。延迟量是根据编程的梯度开始与检测器中紫外线吸收剂显示时间之间的差计算得出的。

等度方法的开发应从相同的填充材料和化合物在梯度洗脱时的溶剂组成开始。如果这样做您应该获得大约2且不小于1的保留因子。现在,您开始了一种用于其他测定的简单快速的等度方法。拥有如此低的保留因子可能就足够了。另一方面,人们希望保留系数稍高一些,可能在2到5之间。要获得此保留系数,您只需要稍微调整溶剂成分即可。

对于含量均匀性,稳定性测试和溶出度测试,您不需要像杂质分布图这样的高性能色谱柱。您应该选择一个较短的柱。通常,即使是5 cm 5μm的色谱柱也能获得令人满意的结果,与25 cm 5μm的色谱柱相比,运行时间要短得多,背压也要低得多。对于溶出度测试,您可以考虑使用保护柱来保护分析柱免受酸性样品的侵害。但是,不需要对方法进行重大重新开发。实际上,相同的简单等度方法可用于含量均匀性,稳定性测试和溶出度测试。这也应该简化方法验证过程(3)。
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