主题:【已应助】同一个样品在液相重复进样两次,出峰时间变化

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Ins_15300701
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柱温控制在室温,流动相是乙腈-0.4%磷酸(10:90),样品分别是忍冬藤粉末和绿原酸对照品,前前后后用序列进样跑了好几次出峰时间都是不一致,今天跑的时候还特意把平衡时间延长到一个半小时,请问这是哪里出现了问题呀?
最佳答案:叮叮当当回复于2021/09/16
峰前移或退后有规律的变化一般可能是1,流动相没平衡,如低浓度的缓冲液或离子对试剂,样品对pH变化极敏感。2,温度变化,当天气变化快,分析时间长,比较明显,用柱温箱,空调解决此类问题。3流动相挥发,尤其用挥发性的酸时,时间长了酸度会发生变化,流动相新鲜配置。4,仪器尤其泵的运行时间长后,重现性不好,仪器老化,在梯度分析时尤其明显,也可能流速不稳,或有气泡。5 在分析某样品后,柱子可能发生改性,再次分析重现性变差,清洗或再生柱子。6 进样浓度不一,溶剂不一,也会造成保留时间不一致。
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叮叮当当
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峰前移或退后有规律的变化一般可能是1,流动相没平衡,如低浓度的缓冲液或离子对试剂,样品对pH变化极敏感。2,温度变化,当天气变化快,分析时间长,比较明显,用柱温箱,空调解决此类问题。3流动相挥发,尤其用挥发性的酸时,时间长了酸度会发生变化,流动相新鲜配置。4,仪器尤其泵的运行时间长后,重现性不好,仪器老化,在梯度分析时尤其明显,也可能流速不稳,或有气泡。5 在分析某样品后,柱子可能发生改性,再次分析重现性变差,清洗或再生柱子。6 进样浓度不一,溶剂不一,也会造成保留时间不一致。
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xiaolanzi5
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你这偏的也太大了,是不是柱子有问题啊。
安平
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楼主详细说说具体分析条件为好。

标准样品是否存在相同的问题?

目前看溶剂峰保留比较稳定,那么硬件系统问题不大。

考虑流动相有没有可能发生性质变化。或者梯度洗脱的结束强度不足,不能彻底洗脱样品中的杂质。。。
Salyu
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先看看压力是否正常,然后流动相重新混匀一下再超声,换根柱子试一下
Ins_15300701
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原文由 安平(byron1111) 发表:楼主详细说说具体分析条件为好。标准样品是否存在相同的问题?目前看溶剂峰保留比较稳定,那么硬件系统问题不大。考虑流动相有没有可能发生性质变化。或者梯度洗脱的结束强度不足,不能彻底洗脱样品中的杂质。。。
我是等度洗脱,从头到尾都是固定的一个流动相比例,这个图前面两个是对照品,后面两个是我的药材样品,而且这柱子跑其他的对照品和样品不会出现这么大的偏移
Ins_15300701
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原文由 xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:你这偏的也太大了,是不是柱子有问题啊。
我也在想是不是柱子的问题…但这根柱子跑其他样品好像又是正常的不会出现这么大的偏移
Ins_15300701
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补充:忍冬藤粉末加甲醇超声后滤过进样,绿原酸对照品是直接加甲醇配置滤过进样。进样量都是8ul,流速1ml/min,进样前先流动相各100%排气了3min,排气结束后用乙腈冲柱然后用乙腈-水(10:90)过渡最后到乙腈-0.4%磷酸(10:90)冲,流动相乙腈和0.4%磷酸是当天新鲜配置的。
安平
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      等强度洗脱,而且其他项目分析结果正常。

      那么考虑一下是否当前的分析方法不适合此样品为好。

      建议是用流动相做标品和样品的溶剂,延长一下每次数据采集的时间为好。