主题:【已应助】考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

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Ins_0344faa5
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用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,发现蛋白质与染色液混合后吸光度值很不稳定,在1h内时间越长,吸光度越来越低,与文献上的越来越高并趋于稳定有所差异,不知道是不是这个原因,做加标回收率很低,求大神指教到底是什么原因会导致这样的情况。
推荐答案:JOE HUI回复于2021/10/09
原因可能如下:1.由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差。2.仍有些物质干扰此法测定:去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1mol/L的NaOH。3.标准曲线也有轻微的非线性。  操作注意事项:不可使用
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sdlzkw007
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可能是显色的条件不够合适,比如酸碱度是否满足?显色温度是否合适?显色剂是否纯度满足要求?
mingxiaoyan
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JOE HUI
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原因可能如下:1.由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差。2.仍有些物质干扰此法测定:去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1mol/L的NaOH。3.标准曲线也有轻微的非线性。  操作注意事项:不可使用