主题:【第十四届原创】西达本胺对SCLC肿瘤抑制作用的机制研究

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西达本胺对SCLC肿瘤抑制作用的机制研究

西达本胺促进SCLC细胞系组蛋白乙酰化

  为验证西达本胺是否上调SCLC细胞系的乙酰化水平,我们使用Western blot检测了不同浓度(IC10IC20IC50)西达本胺处理48 h后,SCLC细胞系中乙酰化组蛋白H3、H4表达水平,并以组蛋白H3、H4表达水平为对照。结果如图2-1所示。在四种亚型细胞系中,总组蛋白H3、H4表达水平无变化,乙酰化组蛋白H3、H4表达量随加药浓度增大而增多,这证明了西达本胺对SCLC细胞系组蛋白乙酰化的促进作用,这种作用呈剂量依赖性。

A

 

图西达本胺处理48 h后乙酰化组蛋白在H69、H446(图-2-1 A)、H526、DMS114(图2-1 B)细胞中的表达情况


西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导SCLC细胞系凋亡

我们的功能实验表明,西达本胺可剂量依赖的促进SCLC细胞凋亡,但其机制尚未明确。依据国内外报道,西达本胺主要通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。除此之外,西达本胺使线粒体DNA双链断裂,发生损伤。为探究其是否通过此途径在SCLC细胞系中发挥作用,我们检测了加药48 h后,H69、H446、H526DMS114细胞中由线粒体介导的Caspase信号通路相关蛋白Bcl-2,Bax,细胞色素C,Caspase 9,cleaved Caspase 9,PARP,cleaved PARP,Caspase 3,cleaved Caspase 3以及DNA双链断裂标志物 γH2AX表达水平。Western blot结果显示,Caspase 9,PARP ,Caspase 3表达水平无明显变化,Bcl-2表达下调,其余蛋白表达均上调(图2-2)。这些结果表明,在SCLC细胞中,西达本胺可以通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。

西达本胺通过抑制Cyclin-CDK复合物活性阻滞SCLC细胞系周期

据文献报道,不同HDACI对不同细胞阻滞时相不一致。为验证西达本胺对SCLC细胞周期的作用,我们检测了西达本胺处理48 h后,H69、H446、H526、DMS114细胞中细胞周期相关蛋白的表达水平,如图2-3所示。H69H526、DMS114细胞系中P21、P27表达上调,Cyclin A2与CDK2表达下调,说明西达本胺阻滞H69H526、DMS114S期。在H446细胞系中Cyclin E1与CDK2表达下调,说明西达本胺阻滞其于G1/S期。

     

C                                      D

   

图西达本胺处理48 h后周期蛋白在H69(图2-3 A)、H446(图2-3 B)、H526(图2-3 C)、DMS114(图2-3 D)细胞中的表达情况


小结



1.西达本胺可以增强SCLC细胞系组蛋白乙酰化水平。

2.西达本胺诱导SCLC细胞凋亡的机制可能与其激活线粒体介导的caspase凋亡途径有关。

3.西达本胺可阻滞SCLC细胞周期,可能与其上调细胞周期蛋白激酶抑制剂表达、从而抑制Cyclin-CDK复合物活性有关。
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