主题:【已应助】用API5000做尿液标养,目标物出峰为什么提前了

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Ins_55dbc44d
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    之前用甲醇当溶剂做的标样出峰时间是1.57min,然后用尿液来做标样,手动用MCX固萃以后出峰时间提前到0.55min,然后用10%甲醇,甲醇交替冲洗柱子一下午,现在重新检测甲醇溶剂标样出峰时间回到了1.53min。想问问老师们,这种情况是因为尿液没被萃取干净,萃取液中有无机盐导致的吗?之前我在社区看到固萃可以去盐去蛋白去脂,单这几天尝试固萃的效果都很差,混标液里只有三四个的洗脱有梯度,而且计算回收率只有百分之三十几。
推荐答案:hujiangtao回复于2021/11/18
应该是尿液中基质干扰导致目标物保留时间变化,用MCX柱说明待测物在酸性环境中带正电,无机盐这些过柱时很少会在MCX柱保留,后面用水淋洗时也会洗掉,蛋白等有机物可以在样品中加高氯酸出去,MCX用甲醇淋洗时也会去除残留在柱上的杂质,最后氨化甲醇洗脱时应该没有太多杂质了,如果还是影响保留时间可以加大淋洗液体积
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mingxiaoyan
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如果样品基体十分复杂的情况下,由于基体干扰可能也会使相同的物质具有不同的保留时间,尿液也比甲醇肯定要复杂的多
hujiangtao
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应该是尿液中基质干扰导致目标物保留时间变化,用MCX柱说明待测物在酸性环境中带正电,无机盐这些过柱时很少会在MCX柱保留,后面用水淋洗时也会洗掉,蛋白等有机物可以在样品中加高氯酸出去,MCX用甲醇淋洗时也会去除残留在柱上的杂质,最后氨化甲醇洗脱时应该没有太多杂质了,如果还是影响保留时间可以加大淋洗液体积
lijing320323
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Ins_55dbc44d
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原文由 lijing320323(lijing320323) 发表:咨询工程师
嗯,主要是没地方问,固萃柱是按方法买的,仪器是二手公司装的,实验室里也没大佬坐镇,现在想确定柱子问题还是仪器分析器问题
Ins_55dbc44d
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:应该是尿液中基质干扰导致目标物保留时间变化,用MCX柱说明待测物在酸性环境中带正电,无机盐这些过柱时很少会在MCX柱保留,后面用水淋洗时也会洗掉,蛋白等有机物可以在样品中加高氯酸出去,MCX用甲醇淋洗时也会去除残留在柱上的杂质,最后氨化甲醇洗脱时应该没有太多杂质了,如果还是影响保留时间可以加大淋洗液体积
好的,那我再尝试一下,今天刚把保留时间冲洗回去1.53min
ie4680180
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出峰时间太快,基质和溶剂效应大。建议梯度洗脱宜慢,另外换一根长的柱子试试。
歪果仁zZ
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你这是两个问题,出峰时间与你的前处理流程关系不大的,也从没听说过去除基质最差的沉淀蛋白后的样品会受到基质的影响而改变出峰时间。
你这明显是溶剂效应导致的出峰时间改变,前处理后加一步氮吹复溶就解决了,或者改变一下进样量。
回收率实验有参考文章吗,或者你的回收率实验做的有问题,也可以重新开个帖子详细介绍。