主题:【第十四届原创】液相DAD不出峰,常见和不常见的原因都在这里

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液相不出峰是色谱分析中较为常见的问题,本文从以安捷伦1260 DAD检测器为例,目标化合物有紫外吸收的情况下,分析可能遇到的常见和罕见原因。

以下是从泵,进样器,柱子,检测器和软件依次排序

1. 无压力,没关闭排空阀或者泵头进空气不能吸液。比如上一次实验没正确的设置瓶填充,流动相被吸干,泵头进空气,那再次使用时,即使进行了排空操作,泵也可能没吸入流动相,没压力,不出峰。常见指数★★★★★

2. 错误的流动相,常见的是流动相通道与流动相液体不匹配。比如原A通道是甲醇,因其他原因装成了水,导致流动相不匹配,不出峰。常见指数★★★★☆

3. 流动相配置错误,使用了错误的试剂配置流动相,流动相pH没调节正确(常见于用pH试纸调节),流动相比例设置错误,导致不出峰。常见指数★★★★☆

4. 错误的样品瓶,在软件站中设置了错误的样品位置,进样错误不出峰。常见指数★★★★★

5. 错误的样品,常见于样品称取错,稀释倍数不对,样品分解析出,分层。常见指数★★★★☆

6. 没设置样品瓶位置(为空)或者进样量设置为0,没进到样,不出峰,常见指数★★★★☆,见图1



图1



图2

7. 样品量太少,低于0.5mL,进样器吸不上液,不出峰。这可能出现在同一样品多次进样时,液面降低发生。常见指数★★★★☆

8. 错误的柱子,色谱柱与方法不匹配。比如需要SAX柱子,缺没确认柱子,直接使用原仪器上的C18柱子,不出峰。常见指数★★★★☆

9. 氘灯能量不足,虽然灯能开启,自检能通过,但在所需波长下,氘灯能量不足,此时基线可能出现波动,导致不出峰。常见指数★★★★☆

10. 系统有微漏,化合物并未进入到流通池,流通池有污染,破裂,常见指数★★★☆☆

11. 未开灯,如果在方法中取消选中了“检测所需的灯已开启”,那此时检测器直接就绪,由于没开灯,所以不出峰,而且基线很平。常见指数★★★☆☆,如图3



图3

12. 检测器没正确连接。比如DAD与FLD/RID串联时可能出现。上一实验使用了FLD,而且是柱温箱出来的管线直接连接FLD,没经过DAD,使用完毕后没接回DAD。此时仪器不报错,也没任何异常,导致不出峰。常见指数★★☆☆☆,如图4



图4 红色为实际流路,黄色为DAD流路,黄色流路并未接入系统

13. 检测器设置了时间程序,比如方法所需波长为220nm,目标化合物在10min时出峰,但该方法是在另一方法上修改而来,原方法的时间程序是在7min时切换波长到320nm,也就是说在7min后,仪器的实际波长是320nm,这样导致不出峰。常见指数★★★☆☆,如图5



图5

14. 假象,工作站量程设置的太大,比如峰高本来只有10mAu,但在线工作站设置成了1000,此时峰高就很低,误以为没出峰。另外工作站信号调用错误,比如只调用了压力信号没调用吸光度信号,误以为没出峰。常见指数★☆☆☆☆
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