主题:【第十四届原创】正相手性分析峰形改善分享

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(一)背景:

分析某项目中控反应液(样品状态为淡黄色固液混合物)前期无法得到很好的峰形,但对照品峰形比较好,经过一些列的排查最终找到了影响峰形的原因并解决了此问题。

(二)问题呈现

取样品溶液适量用稀释剂稀释至10mg/mL(稀释剂为:正己烷乙醇=11,发现峰形、保留时间均不是太理想



消旋体(定位用,纯度很高)同样如此。



(三)原因分析与排查

出现此类现象的主要原因可能由以下四点造成:

1 溶剂效应

2 色谱柱

3 流动相

4 样品

之后逐一排查

1降低进样量,峰形未有明显改善,且采用DAD扫描,分裂的两个峰紫外吸收曲线也明显不一致,故排除溶剂效应。

2 对色谱柱进行排查:连续进几针消旋体(定位用,纯度很高),发现峰形逐针改善



猜测色谱柱中有某些物质引起峰形变化,且该物质可被冲洗掉。后用HexaneEtOH=7030冲洗色谱柱约一个半小时。平衡后进对照品,出峰与标准图谱一致。



故确定色谱柱、流动相、仪器等无问题。

后继续进样,样品出峰依然不正常。紧接着样品进消旋体,发现出峰也不正常。





最终确定问题出在样品上。

(三)问题解决

工艺人员沟通后,得知样品中有原料消旋体、成品和乙醇钠。

分析此结构,为酸性化合物,乙醇钠为碱性,尝试往流动相中加入0.1%的甲酸。

冲洗约半小时后进样,标准品出峰正常,样品峰形有极大改善,但还是和正常的图谱还是对应不上



后来与技术人员交流得知,样品需经过前处理。处理方式为用酸调pH2~3MTBE萃取,拉干。以尽可能减少样品中组分对检测的影响。

处理后的样品为黄色粘稠液体,方法可重现。





(四)总结:

酸性化合物测手性时,碱性条件下,峰形较差。在酸性的流动相体系下,峰形尖锐。测酸性化合物的手性时,若峰形异常,可用酸性流动相冲洗后,再尝试。

影响化合物峰形不单单是流动相一个因素样品溶液的pH同样会影响峰形确保流动相溶液pH和化合物的酸碱性一致才能得到很好的峰形

研发阶段在检测时发现峰形等异常,一定要和工艺人员密切沟通及时了解样品性质切勿脱离工艺自行开发分析方法




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