主题:【已应助】液质分析求助:药物降解产物分析

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最近做了三个样品的液质分析,有些问题不明白,十分希望可以得到有经验的前辈指导!

一、背景:做单独液相的时候,使用的是uplc,完全出峰时间为22 min;在做LC-MS的时候,使用的hplc,测样时间为20 min。

二、样品内容:三个样品分别是未降解的药物A(一号样,TIC如附件图1)、降解反应不同时间10min的药物A及其产物(二、三号样,TIC如图2、3)

三、问题:

        (1)TIC图中一个峰是否可能含有多种物质?如果是,那么该怎么判断质谱图中的小分子峰是来自于样品中原有的降解产物,还是来自于单一物质被仪器打碎后的碎片呢?(★★★这个问题最希望可以得到前辈们解答)

        (2)同一个样,做液相时会出现很多个峰(如图1),但是在做LCMS的时候,最多只有2个峰(如图3)。以下原因是否均可能导致峰数量不同?(a)LCMS使用的色谱柱分离度效果不佳,导致TIC图中一个峰含有多种物质(b)hplc出峰时间慢,后续还有峰没有出完

        (3)按照原来推测,一二三号样品都应该出现原物质峰且RT相同,但是实际测试结果是不同样品原物质峰RT相差较大,可能的原因有哪些?

四、具体测试条件:单独液相的柱子型号是Waters Acquity BEH C-18,1.7 μm,2.1×100 mm,流动相是10%的乙腈+90% 0.1%磷酸溶液,波长是225nm;LC-MS的柱子型号是 安捷伦 SB-C18,1.8 μm,2.1×50 mm,流动相是10%的乙腈+90% 0.2%甲酸溶液,采用正离子扫描,波长是225nm,测样时间为20 min。
附件:
推荐答案:hujiangtao回复于2021/11/29
1)TIC是总离子流图,包含所有该质谱条件下的离子,所以TIC图谱一个峰里面含有多个离子是可能的,至于是不是目标物降解后的产物仅从TIC图是无法判定的,最起码要用高分辨质谱得到准确分子量然后和谱库比对,再进行质谱断裂结构解析;
2)楼主的液相部分也是UPLC,和液质色谱柱差别不大,梯度程序差别不大的话应该不存在一个出完峰另一个没出完的情况。液相对分离度要求高,所有组分要达到基线分离,液质对分离度要求没那么高,只要离子对不一样,液相没完全分开也不影响定性定量;
3)该实验液相和液质仪器色谱柱、流动相都不相同,保留时间不一样很正常啊,而且看三个图RT时间差别不是很大;同时同一物质不同样品基质保留时间不一致很正常,液质离子化时很容易受基质效应的影响。
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第一个,单纯TIC图是看不出有几个物质的,且多物质同一方法分析的时候很多时候都是一起出峰的,因为LCMS分析本身没那么注重LC方法,LC条件也不是很允许,柱子短。想要了解TIC表显峰是什么物质降解产生的,基本没啥可能,这个主要是生信分析得到的信息哈。
第二个问题结合第一个问题和你自己的理解来就看就可以了哈,
第三个,首先你没法确信这RT时间相同的峰是否是同一个物质,所以不同样品相同TRT时间保留峰没什么可比性,影响不同样品同意物质不同保留时间主要的就是不同基质效应引起的异同哈
hujiangtao
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1)TIC是总离子流图,包含所有该质谱条件下的离子,所以TIC图谱一个峰里面含有多个离子是可能的,至于是不是目标物降解后的产物仅从TIC图是无法判定的,最起码要用高分辨质谱得到准确分子量然后和谱库比对,再进行质谱断裂结构解析;
2)楼主的液相部分也是UPLC,和液质色谱柱差别不大,梯度程序差别不大的话应该不存在一个出完峰另一个没出完的情况。液相对分离度要求高,所有组分要达到基线分离,液质对分离度要求没那么高,只要离子对不一样,液相没完全分开也不影响定性定量;
3)该实验液相和液质仪器色谱柱、流动相都不相同,保留时间不一样很正常啊,而且看三个图RT时间差别不是很大;同时同一物质不同样品基质保留时间不一致很正常,液质离子化时很容易受基质效应的影响。
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2021/11/29 20:50:16 Last edit by hujiangtao
lijing320323
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如果峰的对称性一般,保留时间有偏差是正常的,当然如果峰型完全对称,保留时间应该一致;峰积分的时候可以将保留时间左右的阈值扩大,不影响定量结果。看你这个图,不知道哪个是目标物,如果偏差超出了百分之二,考虑下减少进样量,延长平衡时间。

紫外液相是测的紫外吸光度,根据色谱柱的分离效果,有目标吸光度的就出峰,图谱可叠也加可单看一个波长下的图谱,质谱是检测的分子量,在你设定的分子量范围内,有分子量的都会有响应,所有的响应聚在一起成为了总离子流图,所以两个图一般是对不上的。质谱和紫外吸光度设置了N个波长的意义是一样的,分析数据时提取离子流找想要的分子量即可
lijing320323
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