主题:【已应助】多杀霉素a出峰时间后移

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宋兵乙
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之前做方法验证,多杀a出峰时间1.35min,过了半年再做样品检测,仪器设备柱子都是之前的,出峰时间后移到2.25,流动相,色谱柱也换了新,但是,还是没见改善,方法总共3min,请问还可能出现的原因在哪里呢?各位大神
推荐答案:hujiangtao回复于2022/02/14
看一下流动相pH值是否有变化,色谱柱没变的话一般保留时间和流动相pH关系很大;液相方法3分钟有些短,前面梯度洗脱程序有些变化率太快,可以适当延长低有机相比例到搞高有机相的时间,让梯度平缓一些
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卧槽,见识了,保留时间也太短了吧,时长3mini.。看看你的管路有无变动流动相ph有无变化,剩下的这两点比较可疑
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hujiangtao
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看一下流动相pH值是否有变化,色谱柱没变的话一般保留时间和流动相pH关系很大;液相方法3分钟有些短,前面梯度洗脱程序有些变化率太快,可以适当延长低有机相比例到搞高有机相的时间,让梯度平缓一些
检测老菜鸟
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之前做方法验证,多杀a出峰时间1.35min,过了半年再做样品检测,仪器设备柱子都是之前的,出峰时间后移到2.25,流动相,色谱柱也换了新,但是,还是没见改善,方法总共3min,请问还可能出现的原因在哪里呢?

建议查看是否其他物质都发生了整体后移。如果是整体后移,建议查看压力是否和之前一致、柱效是否因为长久未做或者时间问题导致降低。
如果是仅仅这个物质后移,建议查看方法、流动相配置尤其是pH(如有缓冲盐之类的也应考虑试剂本身)等条件是否改变。
宋兵乙
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:看一下流动相pH值是否有变化,色谱柱没变的话一般保留时间和流动相pH关系很大;液相方法3分钟有些短,前面梯度洗脱程序有些变化率太快,可以适当延长低有机相比例到搞高有机相的时间,让梯度平缓一些
好的,谢谢
宋兵乙
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:看一下流动相pH值是否有变化,色谱柱没变的话一般保留时间和流动相pH关系很大;液相方法3分钟有些短,前面梯度洗脱程序有些变化率太快,可以适当延长低有机相比例到搞高有机相的时间,让梯度平缓一些
谢谢,多谢你
歪果仁zZ
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流速发生变化, 检查是否有漏;
更换泵的密封,排净气泡
色谱柱尚未平衡, 至少用10倍杜体积的流动相平衡色谱柱:
缓冲溶液容量不够,使用的缓冲溶液浓度应保持在20mM至50mM之间
流动相组成发生变化,检查泵;检查滤网;
流动相中的溶剂互溶性差,要防止流动相的挥发或降解;
色谱柱温度发生变化,使用色谱柱恒温箱 ;
杂质在色谱柱中“堆积,” 冲洗色谱柱;
宋兵乙
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原文由 歪果仁zZ(v3255306) 发表:流速发生变化, 检查是否有漏; 更换泵的密封,排净气泡色谱柱尚未平衡, 至少用10倍杜体积的流动相平衡色谱柱: 缓冲溶液容量不够,使用的缓冲溶液浓度应保持在20mM至50mM之间流动相组成发生变化,检查泵;检查滤网;流动相中的溶剂互溶性差,要防止流动相的挥发或降解; 色谱柱温度发生变化,使用色谱柱恒温箱 ;杂质在色谱柱中“堆积,” 冲洗色谱柱;
好的,谢谢
lijing320323
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