主题:【已应助】血浆乙腈沉淀蛋白质之后,空气吹干,底下有一层渣子附着在管壁,怎么复溶

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Ins_43fc623a
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500微升血浆乙腈沉淀蛋白质之后,空气吹干,底下有一层渣子附着在管壁,怎么复溶才能把药物都溶解在溶液中,
为了浓缩药物,复溶液只能用250微升,这体积用什么合适,用的是反向色谱柱,
试了甲醇和乙腈,复溶的不够,回收率也差了
有什么办法吗
推荐答案:歪果仁zZ回复于2022/02/24
复溶的过程发生了二次蛋白沉淀。一定配比下,甲醇乙腈蛋白沉淀率虽然很高,但也是有限的,上清吹干再复溶的过程又将未沉淀完全的蛋白沉淀了一次,发生了浑浊,这样的现象很常见。一般需要再进行一次离心,小心取上层进样。如果回收率不高,考虑仔细考察目标物溶解最适宜的溶剂。因为液质检测灵敏度很高,没有文件规定回收率必须达到多少,只要低中高质控回收率保持稳定就可以,60-70%的回收率也挺常见。
该帖子作者被版主 hujiangtao5积分, 2经验,加分理由:鼓励发帖
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hujiangtao
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如果目标物易溶于甲醇乙腈,250ul也够用了,回收率不好不一定是没溶解完全,也可能是基质效应的影响
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xiaolanzi5
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能看到的渣子不一定是目标物。回收率不够不一定是复溶过程出的问题。氮吹过程,复溶溶剂的酸碱性,基质抑制等都会有影响。
Ins_43fc623a
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原文由xiaolanzi5(xiaolanzi5)发表:能看到的渣子不一定是目标物。回收率不够不一定是复溶过程出的问题。氮吹过程,复溶溶剂的酸碱性,基质抑制等都会有影响。
怎么判断目标物的酸碱性呢,网上查也查不到,标液是用甲醇溶的,所以没用ph计,是通过结构式看吗
xiaolanzi5
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原文由 Ins_43fc623a(Ins_43fc623a) 发表:怎么判断目标物的酸碱性呢,网上查也查不到,标液是用甲醇溶的,所以没用ph计,是通过结构式看吗
在实际基质中该物质应该是羧酸的形式存在,而不是钠盐,结构中还含羟基,应该是酸性。可以查一下该物质pka,也能判断酸碱性。
歪果仁zZ
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复溶的过程发生了二次蛋白沉淀。一定配比下,甲醇乙腈蛋白沉淀率虽然很高,但也是有限的,上清吹干再复溶的过程又将未沉淀完全的蛋白沉淀了一次,发生了浑浊,这样的现象很常见。一般需要再进行一次离心,小心取上层进样。如果回收率不高,考虑仔细考察目标物溶解最适宜的溶剂。因为液质检测灵敏度很高,没有文件规定回收率必须达到多少,只要低中高质控回收率保持稳定就可以,60-70%的回收率也挺常见。
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