主题:【已应助】怎么分离杂质跟目标物质

浏览 回复14 电梯直达
古代的月亮
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我的流动相A 甲醇+B 1%乙酸水。图一(上为标准品,图下为加标)等度洗脱,A:B=1:1。图2(上为样品,下为加标)等度洗脱,比例是A:B=80:20,这时候分的不是分好,但是能看出来分开了,所以试了A:B=90:10,A:B=70:10,效果都不好。图3(上为加标,下为标准品)梯度洗脱,0-2min,A 50%;2-3min,A 90%;3-7min,A 90%;7.1-10min,A 50%。最终分离的效果都不好,想问下大神的建议。顺便问下调整流动相的规律是什么,在一个未知物面前,怎么调整流动相比例,快速找到目标峰,然后如何将目标峰与杂质分开呀,感觉很多时候等度不太行,改变流动相比例,目标峰是变了,但是杂质峰跟着一起变。很多文献说梯度洗脱可以去除杂质,但是我不太会,望大神给予经验,谢谢。
图1

                                                                                                                                             
推荐答案:hujiangtao回复于2022/06/22
分离效果不好的时候梯度洗脱程序变化速率缓慢一些
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wuyuzegang
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秘诀1: 由强到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验, 这样可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2  三倍规则 :每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量,保留因子约增加3倍,此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中,注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3  粗调转微调:当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。
先100%的有机溶剂,在降下来。因为有些分离96%即可分离
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xiaolanzi5
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感觉您这个在梯度下应该能分开。建议a相在初始比例为10%或5%,缓慢升高a相比例,到20分钟时a相为95,保持6分钟后,降到5%,整个过程30分钟。先看看能不能分开,如果能分开再缩短一针时间。另外前处理过个spe柱看看,加强一下净化。
hujiangtao
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分离效果不好的时候梯度洗脱程序变化速率缓慢一些
古代的月亮
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原文由 wuyuzegang(dahua1981) 发表:
秘诀1: 由强到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验, 这样可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2  三倍规则 :每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量,保留因子约增加3倍,此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中,注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3  粗调转微调:当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。
先100%的有机溶剂,在降下来。因为有些分离96%即可分离
好的,受教
古代的月亮
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
分离效果不好的时候梯度洗脱程序变化速率缓慢一些
好的,开始就是想早点分离出来,目标峰10分钟足够出来了,就想10分钟能不能把杂质分开
检测老菜鸟
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)梯度洗脱,0-2min,A 50%;2-3min,A 90%;3-7min,A 90%;7.1-10min,A 50%。
你这个思路是错的。2分钟的梯度是不行的。一般试方法,像出峰这么近的,可以再低一些有机相,比如20,30之类的。然后最好是1min10%浓度梯度或者更低到你的目标梯度。

bslwg
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古代的月亮
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原文由 检测老菜鸟(v3295053) 发表:
)梯度洗脱,0-2min,A 50%;2-3min,A 90%;3-7min,A 90%;7.1-10min,A 50%。
你这个思路是错的。2分钟的梯度是不行的。一般试方法,像出峰这么近的,可以再低一些有机相,比如20,30之类的。然后最好是1min10%浓度梯度或者更低到你的目标梯度。

好的,我试了0-3min,A 20%,8min,A50%,10min,A50%,12.1min,A90%,15min,A90%,15.1min,A20%,18min,A20%。这样跑完还是不行,你有啥好的建议吗
                                                                                                                                       
hnteng
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1%的醋酸?用太多了。

  你这个估计用甲醇分不开,换用乙腈,分辨率高一些。这样乙腈比例可能30%就够了。
  你得先用高比例有机相,再逐步降低有机相比例来调节。比如,先用90%乙腈,再80%,再降。。。
检测老菜鸟
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原文由 古代的月亮(Ins_64fa449e) 发表:
好的,我试了0-3min,A 20%,8min,A50%,10min,A50%,12.1min,A90%,15min,A90%,15.1min,A20%,18min,A20%。这样跑完还是不行,你有啥好的建议吗
                                                                                                                                       
图呢                   
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