主题:【已应助】关于定量上限响应上不去问题

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检测血浆样品药物浓度。线性范围600倍。
通过增加前处理(蛋白沉淀)稀释倍数,改变稀释剂和,更换流动相,色谱柱,梯度,质谱参数,进样量均未能改善,目前定量上下限响应为300倍左右。ESI源,分子量171。
想问各位老师,这种情况该怎么进行方法开发。
推荐答案:hujiangtao回复于2022/06/23
可能这种物质高浓度线性就是不好,一般液质线性范围比较窄,100倍也正常。实在不行高浓度稀释到曲线范围内再测定
该帖子作者被版主 hujiangtao5积分, 2经验,加分理由:鼓励发帖
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先维护一下离子源部件;其次可以校正一下质谱;最后再优化一下该物质的质谱参数
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wuyuzegang
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可以参考一下这个提高响应的方法
十个技巧帮你迅速提高化合物在液质中的响应

1、成熟规范的样品制备方法是整个LC-MS分析的重要前提。样品预处理各步不能随意省略,如萃取、分离、去盐等。某些化合物必须化学衍生化以适应LC-MS 要求,如磷酸酯水解。若MS信号实在太低,应考虑换另外的样品处理方法。浓度非常低的样品不能保存太长时间,容器吸附、药物自身分解等原因会使样品浓度降低,标准品工作液现配现做。
2、离子化方式需要根据样品的性质而确定:适合ESI(IS):高极性化合物以及大分子,蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子;胺类、季铵盐等;含杂原子化合物如氨基甲酸酯等。适合APCI(HN):弱极性/中等极性的小分子,如脂肪酸,邻苯二甲酸等;含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等,适合。碱性化合物宜用正离子方式,酸性化合物宜用负离子方式,如未知,可能正负都要做,有些化合物正负都出峰,选择灵敏度高的方式,不明确的优先用正离子方式试。
3、根据化合物类型选择流动相组成,甲醇-水,乙腈-水或甲醇-乙腈-水,某些化合物只有某种流动相体系才出峰。一般正离子方式用甲醇,负离子方式用乙腈好些,通常有机相比例高些好。梯度的设定:梯度变化太快对离子化效率影响很大,相应源参数也应该改变,如恒定比例流动相能满足分离要求时,尽量不用梯度,尤其定量分析时。流动相中加入甲酸、乙酸铵等可提高正离子化效率,但是否加酸不是绝对的,还要根据LC的分离情况,样品在酸性条件下的稳定性等决定。通常PH值低些 比率高, PH值高些  、  或  比率高。
4、溶解样品的溶剂:用流动相或甲醇、乙腈溶比用含水多的溶剂LC峰系形好。如果常用的流动相不能很好溶解样品,可用少量特殊溶剂先将样品溶解后再用流动相稀释。LC流量在色谱柱和MS允许情况下适当可以压缩峰宽,使峰强度提高。当只有粗色谱柱,只能大流量时可采用三通分流,以适应MS的流量要求。选细色谱柱,如内径2mm,进样量可以小,提高相对浓度,离子化效率,灵敏度。换长一些的色谱柱,对定性分离效果好,但分析时间延长,如峰形仍不理想,可考虑另选其他型号色谱柱。柱后补偿:当不得不用高浓度TFA时,常用异丙醇,解决信号抑制问题。柱后衍生化,增加离子化。
5、仪器参数的优化:CAL先校准,用PPG或一已知化合物检验,如偏差不大,可以不用做质量校准,但偏高偏低要心中有数。先用浓度大约0.1-1ppm的标样,通过syringe pump,以5-10ul/min优化COMPOUND项下面的参数,如DP,CE,EP,CXP及CAD等。顺序:Q1 SCAN- PRODUCTION SCAN - MRM 。不同化合物参数有可能差别很大。再接通LC用FIA优化其他参数及源位置, 或接一个三通,样品仍由注射泵进入离子源,同时LC保持需要的流量,优化温度和GAS1及2,CXP,CAD,EP优化后通常不用再改,在保证充分样品离子化基础上,DP低些使母离子丰度提高,总灵敏度相应提高。
6、仪器参数的优化:质量范围不要太宽,涵盖待测离子再增加20-30AMU即可。采样时间适当长些噪声低,当同时检测数十对离子时,MRM采样时间可以数十毫秒.同时检测数对离子时,可100-200毫秒。母、子离子输入的质量数值要选准,要根据Q1 SCAN及PRODUCTIONSCAN得到的结果输入,不能只是整数。当不能确定精确质量数时,可选待测质量数上下各0.1AMU,同时数对离子优化,最终找出灵敏度最佳的一对离子。例如321.0-152.0,321.1-152.0,320.9-151.9。若样品较杂,同一化合物要选择几对母、子离子,经进样实验找出哪对有干扰,去掉,保留不易受干扰的1-2对离子。
7、根据LC流量和流动相组成确定温度和GAS1及GAS2,当流量大,水相多时,温度及气流要大。离子源喷雾位置是根据LC流量调节的,基本上流量固定位置就固定。调节喷雾电压,但太高有可能放电。调节Q1及Q3分辨率。许多源参数互相影响,需要反复细调, 使信噪比得以改善。
8、做完含生物体液样品后,LC需多冲些时间,使吸附到色谱柱上的干扰物完全洗脱下来。
若本底高,清洗离子源喷雾针管和oriface,喷雾针可拆下超声清洗,oriface要用无毛纸沾溶剂擦 。清洗管路,可从源上拆下PEEK,或将源从仪器上取下,用SYRINGE PUMP洗,换不同溶剂,极性、非极性、酸等轮番冲洗,最后甲醇/水。
9、用过含酸的流动相后,色谱柱,离子源都要用甲醇/水冲,延长仪器寿命。做完MRM后,用手动使仪器处于Q1 SCAN,降温,停大流量LC,最后关气,但管路中最好有些水,不要完全干。
10、纯标样分析时,母、子离子的分辨率可都选LOW,S/N提高一倍,而噪声并不增高,若复杂混合物,有基质干扰则不宜选LOW。适当加大进样量可提高响应。也可以采用浓缩样品,测定后再推算回原始浓度。分析后的谱图平滑后可提高信噪比,可多次平滑。当化合物很稳定不易产生碎片,可考虑采用Ar、Xe等原子量较大的气体,以增加碰撞能量。
xiaolanzi5
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hujiangtao
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可能这种物质高浓度线性就是不好,一般液质线性范围比较窄,100倍也正常。实在不行高浓度稀释到曲线范围内再测定
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原文由 xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:什么物质?
左乙拉西坦
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原文由 123(m3149125) 发表:先维护一下离子源部件;其次可以校正一下质谱;最后再优化一下该物质的质谱参数
谢谢,老师意见
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原文由 wuyuzegang(dahua1981) 发表:可以参考一下这个提高响应的方法十个技巧帮你迅速提高化合物在液质中的响应1、成熟规范的样品制备方法是整个LC-MS分析的重要前提。样品预处理各步不能随意省略,如萃取、分离、去盐等。某些化合物必须化学衍生化以适应LC-MS 要求,如磷酸酯水解。若MS信号实在太低,应考虑换另外的样品处理方法。浓度非常低的样品不能保存太长时间,容器吸附、药物自身分解等原因会使样品浓度降低,标准品工作液现配现做。2、离子化方式需要根据样品的性质而确定:适合ESI(IS):高极性化合物以及大分子,蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子;胺类、季铵盐等;含杂原子化合物如氨基甲酸酯等。适合APCI(HN):弱极性/中等极性的小分子,如脂肪酸,邻苯二甲酸等;含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等,适合。碱性化合物宜用正离子方式,酸性化合物宜用负离子方式,如未知,可能正负都要做,有些化合物正负都出峰,选择灵敏度高的方式,不明确的优先用正离子方式试。3、根据化合物类型选择流动相组成,甲醇-水,乙腈-水或甲醇-乙腈-水,某些化合物只有某种流动相体系才出峰。一般正离子方式用甲醇,负离子方式用乙腈好些,通常有机相比例高些好。梯度的设定:梯度变化太快对离子化效率影响很大,相应源参数也应该改变,如恒定比例流动相能满足分离要求时,尽量不用梯度,尤其定量分析时。流动相中加入甲酸、乙酸铵等可提高正离子化效率,但是否加酸不是绝对的,还要根据LC的分离情况,样品在酸性条件下的稳定性等决定。通常PH值低些 比率高, PH值高些      、    或    比率高。4、溶解样品的溶剂:用流动相或甲醇、乙腈溶比用含水多的溶剂LC峰系形好。如果常用的流动相不能很好溶解样品,可用少量特殊溶剂先将样品溶解后再用流动相稀释。LC流量在色谱柱和MS允许情况下适当可以压缩峰宽,使峰强度提高。当只有粗色谱柱,只能大流量时可采用三通分流,以适应MS的流量要求。选细色谱柱,如内径2mm,进样量可以小,提高相对浓度,离子化效率,灵敏度。换长一些的色谱柱,对定性分离效果好,但分析时间延长,如峰形仍不理想,可考虑另选其他型号色谱柱。柱后补偿:当不得不用高浓度TFA时,常用异丙醇,解决信号抑制问题。柱后衍生化,增加离子化。5、仪器参数的优化:CAL先校准,用PPG或一已知化合物检验,如偏差不大,可以不用做质量校准,但偏高偏低要心中有数。先用浓度大约0.1-1ppm的标样,通过syringe pump,以5-10ul/min优化COMPOUND项下面的参数,如DP,CE,EP,CXP及CAD等。顺序:Q1 SCAN- PRODUCTION SCAN - MRM 。不同化合物参数有可能差别很大。再接通LC用FIA优化其他参数及源位置, 或接一个三通,样品仍由注射泵进入离子源,同时LC保持需要的流量,优化温度和GAS1及2,CXP,CAD,EP优化后通常不用再改,在保证充分样品离子化基础上,DP低些使母离子丰度提高,总灵敏度相应提高。6、仪器参数的优化:质量范围不要太宽,涵盖待测离子再增加20-30AMU即可。采样时间适当长些噪声低,当同时检测数十对离子时,MRM采样时间可以数十毫秒.同时检测数对离子时,可100-200毫秒。母、子离子输入的质量数值要选准,要根据Q1 SCAN及PRODUCTIONSCAN得到的结果输入,不能只是整数。当不能确定精确质量数时,可选待测质量数上下各0.1AMU,同时数对离子优化,最终找出灵敏度最佳的一对离子。例如321.0-152.0,321.1-152.0,320.9-151.9。若样品较杂,同一化合物要选择几对母、子离子,经进样实验找出哪对有干扰,去掉,保留不易受干扰的1-2对离子。7、根据LC流量和流动相组成确定温度和GAS1及GAS2,当流量大,水相多时,温度及气流要大。离子源喷雾位置是根据LC流量调节的,基本上流量固定位置就固定。调节喷雾电压,但太高有可能放电。调节Q1及Q3分辨率。许多源参数互相影响,需要反复细调, 使信噪比得以改善。8、做完含生物体液样品后,LC需多冲些时间,使吸附到色谱柱上的干扰物完全洗脱下来。若本底高,清洗离子源喷雾针管和oriface,喷雾针可拆下超声清洗,oriface要用无毛纸沾溶剂擦 。清洗管路,可从源上拆下PEEK,或将源从仪器上取下,用SYRINGE PUMP洗,换不同溶剂,极性、非极性、酸等轮番冲洗,最后甲醇/水。9、用过含酸的流动相后,色谱柱,离子源都要用甲醇/水冲,延长仪器寿命。做完MRM后,用手动使仪器处于Q1 SCAN,降温,停大流量LC,最后关气,但管路中最好有些水,不要完全干。10、纯标样分析时,母、子离子的分辨率可都选LOW,S/N提高一倍,而噪声并不增高,若复杂混合物,有基质干扰则不宜选LOW。适当加大进样量可提高响应。也可以采用浓缩样品,测定后再推算回原始浓度。分析后的谱图平滑后可提高信噪比,可多次平滑。当化合物很稳定不易产生碎片,可考虑采用Ar、Xe等原子量较大的气体,以增加碰撞能量。
谢谢老师。
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:可能这种物质高浓度线性就是不好,一般液质线性范围比较窄,100倍也正常。实在不行高浓度稀释到曲线范围内再测定
谢谢老师的帮助
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原文由 Ins_e6e8ff0d(Ins_e6e8ff0d) 发表:左乙拉西坦
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