主题:【已应助】关于柱子柱效的问题

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我们的仪器是岛津LCMS-8045,平常主要做农残,方法的话是69项,时间10分钟,柱子规格是1.7μm,2.1*50mm的waters,前助理过程是加提取液,加盐包(无水硫酸镁和无水乙酸钠)。然后涡旋离心取上清液在另一离心管加psa+c18+gcb,过膜打瓶,上机。3月份买了一根新柱子,用了不到两个月,大约4500针左右,跑农残10min的方法峰开始分叉,但是跑农残单项3min的方法峰型完好,无论怎么冲跑10min的方法都不行,前段时间用同一根柱子跑展青霉素,突然就跑不出来了,换了一根新柱子后就可以,想问一下展青霉素对柱子的要求比较高吗?农残跑得多的话柱子消耗的这么快吗?还有就是如果我适当减少一下10min农残69种方法中的项目,只跑其中的30项目,柱子用的会不会久一点?还是说我们的前处理过程有不合适的地方,需要改善。目前的话我们是这根柱子反冲在使用,不知道能顶多久。请各位老师指教。
推荐答案:hujiangtao回复于2022/06/28
Q法前处理适合大批量样品筛查,农产品中色素等杂质肯定处理不干净的会残留在色谱柱上,不如SPE小柱去除基质效果好,确实比较费柱子,一般5000次进样柱效下降也正常。不过Q法前处理速度快,对于大批量样品检测有优势,鱼和熊掌不可兼得。可以适当延长高比例有机相冲洗时间,每次走完样品后多冲冲。展青霉素确实对柱子要求比较严,色谱柱脏了很容易不出峰。
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wuyuzegang
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柱子三分使用七分维护,一个是前处理尽量降低基质污染,在一个就是日常维护。
可以参考一下柱子寿命的延长方法
色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外,最主要的是与日常的维护密切相关。为延长色谱柱的使用寿命。色谱柱的使用寿命主要是分局柱效和柱压两个指标来衡量,如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高,通常被认为该色谱柱已经结束。因此,延长色谱柱使用寿命的关键是,消除引起柱效下降和柱压升高的因素。

以下是色谱柱的日常维护方法
一、流动相的PH应在使用的范围内色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10,由于填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,使用寿命变短。由于流动相的PH控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难是色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵住不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰型拖尾、变宽,从而使柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析样品前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
如果色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的,可选择以下方式进行补救:1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min.2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器,然后反向使用。

四、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下:1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min;使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。2、梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min,再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min.含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。注意:过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,区别只是过渡流动相不含缓冲盐。3、缓冲盐析出的补救方法:1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min 2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
五、防止强保留物质在色谱柱上存留强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰型变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多药品特别是复杂样品而言,很难判断其是否是含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱。清洗方法:1、未使用缓冲盐:每天分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min.2、使用过缓冲盐:分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min 3、补救方法:水——乙氰——氯仿(或异丙醇)——乙氰——水,每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min。
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hujiangtao
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Q法前处理适合大批量样品筛查,农产品中色素等杂质肯定处理不干净的会残留在色谱柱上,不如SPE小柱去除基质效果好,确实比较费柱子,一般5000次进样柱效下降也正常。不过Q法前处理速度快,对于大批量样品检测有优势,鱼和熊掌不可兼得。可以适当延长高比例有机相冲洗时间,每次走完样品后多冲冲。展青霉素确实对柱子要求比较严,色谱柱脏了很容易不出峰。
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每次工作结束,用强溶剂冲洗柱是良好的习惯。可用甲醇、乙腈冲,冲去留在柱上的强吸附组分。
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