主题：【第十五届原创】文献方法只做参考

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houjjun

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状元秀发表于：2022/09/15 19:28:59 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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文献方法只做参考

　　有新的实验项目很多实验员都是先查文献，找检测方法，最后按着自己认为比较靠谱的方法实验。有时也用自己的实验现象、实验结果和文献做个对比，以确定自己实验结果的正确性。

　　我第一次做饲料中维生素B2检测（是在客户实验室帮客户做的）时也查了很多资料，实验方法当时依据的是国标GB/T 14701-2002 饲料中维生素B2的测定。国标中有实验方法，我查资料主要是想看看这个实验有没有需要注意的地方，维生素B2色谱峰保留时间，实验中干扰杂质多不多，该物质响应值高不高等信息。资料查好，准备工作做完后开始实验。

　　实验时色谱条件参考的国标给的条件

色谱柱：250mm×4.6mm×5μm（当时客户实验室只有这种色谱柱）；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

进样量：20μL；

检测波长：267nm；

流动相：在已装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA、1.1g庚烷磺酸钠，待全溶解后，加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调解pH至3.4±0.02，过0.45μm滤膜，取该溶液860ml与140ml甲醇混合，超声脱气，待用。

　　以下是国标色谱条件：

　　按这个方法实验出了一些意外，国标说的保留时间约10min，我查的几种文献资料也大概都是8-15min，我设的采样时间是15min，但15min采样结束，色谱图上没有色谱峰，连续做了几次都没出峰。当时在客户现场，一堆人看着，很是丢人。后来客户下班走了，我自己留在实验室继续琢磨继续做。我首先把色谱柱温度控制到35℃（柱温高色谱峰出的快），依然没出峰。于是我又把采样时间改成20min，当时怀疑可能是采样时间短没出峰，但依然失望。后又把采样时间改成25min、30min，结果依然失望。当时都快晚上12点了，心情很是失落。后我把采样时间设成60min，利用这个长时间我重新到网上查找相关资料。找了半天什么也没找到，当时是越找心情越差，那个滋味都不好描述（如果在客户第二天上班前还没解决问题，我都不知道该如何面对客户，毕竟很多文献上都说这个实验难度不大，我也和客户说这个实验没什么难度，保证会做好）。正在我失落不知所措的时候奇迹出现了。维生素B2标准品出峰了，保留时间31分钟多点，后我又联系做了几次样，保留时间基本一致。后回到公司我换用了多根250mm长，规格和客户现场那根差不多的色谱柱，按照在客户现场实验的色谱条件进行多次实验，发现维生素B2用这个方法，保留时间大概在28-33min之间。