主题：【第十九届原创】【老友回归】食用菌双孢菇中总酚含量测定

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发表于：2026/08/01 11:59:23

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食用菌双孢菇中总酚含量测定

（福林酚法）

实验目的：定量测定双孢菇中总酚含量，以没食子酸当量（GAE）表示。

一、实验目的

掌握福林酚（Folin-Ciocalteu）法测定总酚含量的原理与操作。

学会用没食子酸标准品建立标准曲线，定量双孢菇提取液中的总酚。

能正确计算“mg GAE/g DW”表示的结果。

二、实验原理

在碱性条件下，酚类化合物将福林酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成蓝色钼蓝和钨蓝复合物，于 765 nm（或 760 nm）处有最大吸收。吸光度与总酚含量在一定范围内呈线性关系。本实验以没食子酸为标准品，结果以没食子酸当量表示。

三、试剂与仪器

1. 试剂

福林酚试剂（Folin-Ciocalteu，市售，约 1 mol/L）

无水碳酸钠（Na?CO?，分析纯）

没食子酸标准品（纯度≥98%）

甲醇或乙醇（分析纯）

蒸馏水或去离子水

2. 仪器与耗材

紫外-可见分光光度计（石英比色皿，1 cm 光程）

酶标仪

电子分析天平（0.0001 g）

水浴锅或恒温箱（30～40℃）

超声波清洗器

离心机（5000～10000 r/min）

匀浆机、组织捣碎机或液氮研磨装置

棕色容量瓶、试管、移液枪、铝箔纸等

四、溶液配制

福林酚工作液：市售原液用蒸馏水按 1:9（v/v）稀释，即 10% 浓度，现配现用，避光存放。

7.5% 碳酸钠溶液（约 75 g/L）：称取 7.5 g 无水 Na?CO?，蒸馏水溶解并定容至 100 mL。

没食子酸标准储备液（100 μg/mL）：准确称取 10.0 mg 没食子酸，蒸馏水溶解并定容至 100 mL（棕色容量瓶），4℃ 避光保存。

80% 甲醇（或 80% 乙醇）提取液：甲醇（或乙醇）与水按 8:2 体积比混合。

五、实验步骤

1. 双孢菇样品预处理与提取

新鲜双孢菇洗净吸干，称量鲜重后冰浴匀浆（或液氮研磨成粉）。

准确称取约 2.0 g 匀浆（精确至 0.001 g）于 50 mL 离心管，记录鲜重

加 20 mL 80% 甲醇，涡旋混匀，超声提取 30 min（间或摇匀）。

5000～8000 r/min 离心 10 min，取上清。

即为原提取液。如不立即测定，-20℃ 避光保存。

2. 样品待测液准备

取 1.0 mL 原提取液，用蒸馏水稀释至 10 mL，得到测试液。若吸光度超线性范围，可调整稀释倍数，记录总稀释因子

3. 没食子酸标准曲线制作

分别吸取没食子酸标准储备液（100 μg/mL）0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL 于 10 mL 试管中，补水至 0.4 mL（对应没食子酸质量：0、10、20、30、40、50 μg）。

每管依次加入：

2.0 mL 福林酚工作液，摇匀，室温放置 5 min。

1.8 mL 7.5% Na?CO? 溶液，摇匀。

蒸馏水定容至 5.0 mL，盖塞倒转混匀。

用铝箔严密包裹试管（严格避光），于 30℃ 水浴中反应 60 min（或室温 20～25℃ 暗反应 120 min，需与样品完全一致）。

以空白管（0 μg 没食子酸）调零，于 765 nm 处测定吸光度。

或酶标仪测定溶液在 760 nm处的吸光值（OD值）。??

以没食子酸质量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，

4. 样品测定

准确吸取 0.4 mL 测试液于试管中（平行 3 份）。

按标准曲线相同步骤操作：加 2.0 mL 福林酚工作液 → 放置 5 min → 加 1.8 mL Na?CO? → 定容至 5.0 mL → 混匀 → 避光反应（条件同前） → 765 nm 测定吸光度。

将样品吸光度（平均值）代入回归方程，求得 0.4 mL 测试液中的没食子酸当量

5、检测结果分析

在4℃冷藏保存不同天数双孢菇中总酚含量的变化，出现了先升后降的变化，这种“先升后降”的背后，是两种关键酶活性的博弈：

苯丙氨酸解氨酶（PAL）：促进酚类物质合成的酶。在冷藏初期（第1-6天），其活性会短暂升高，导致总酚含量微升或持平。

多酚氧化酶（PPO）：负责氧化酚类物质的酶。低温虽然能抑制其活性，但随着贮藏时间延长，PPO仍会持续作用，消耗酚类物质，导致总酚含量在后期缓慢下降.

#老友回归

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