主题：【第十九届原创】标曲的计算方式Ignore/Include/Force/Blank Offset到底怎么选？（Agilent 液质联用仪）

定量分析里，标准曲线是绕不开的一环。

用 Agilent 液质联用仪做 QQQ 定量，在 Quant My-Way 软件里设置标准曲线时，你一定会遇到 Calibration Curve Origin 这个选项——Ignore、Include、Force、Blank Offset，四种方式。

它们安安静静躺在方法设置里，说明书一笔带过，培训时也未必细讲。可它偏偏直接决定你的标准曲线截距怎么走，低浓度点准不准。

有人一律 Ignore，有人逢曲线必 Force，还有人做了三年，也没搞清楚 Blank Offset 和 Include 到底差在哪。

今天这篇，就把这四种方式一次讲透：它们各自在算什么、结果差在哪、什么场景该用哪个？

一、四种处理方式的核心区别

Ignore（忽略原点）： 软件在拟合曲线时完全不考虑(0,0)点，直接用你进样的标准点做回归。曲线方程是 y = ax + b，截距 b 由数据自己“长”出来。这是 MassHunter 的默认设置。

Include（包含原点）： 软件把(0,0)当作一个额外的校准点加入拟合，相当于你多做了一个“零浓度标准”。曲线仍然有截距，但原点这个“虚拟点”会参与最小二乘计算，把曲线往原点方向“拉”。

Force（强制过原点）： 直接把截距 b 设为 0，曲线方程变成 y = ax。不管你的低浓度点数据长什么样，软件都认为浓度为零时响应一定为零。

Blank Offset（空白补偿）： 这是一个更“聪明”的折中方案。软件先测一个空白样的响应值，把这个空白响应作为固定截距，然后用强制过原点的方式拟合斜率。方程形式是 y = ax + BlankOffset。本质上是在“承认有空白响应”的前提下，用空白响应替代了数据拟合出的截距。

二、什么场景用哪个？

2.1 Ignore（大多数液质方法的稳妥起点）

适用场景：

? 标准曲线覆盖范围较宽（比如两个数量级），高浓度点权重较大

? 不确定空白响应是否稳定

? 监管方法没有明确要求强制过原点

风险：低浓度样品可能报出负值。

2.2 Include（单点校准时的必选项）

适用场景：

? 你只做了一个浓度的校准点（单点法），Ignore 会导致软件无法生成曲线

? 你想让曲线“尊重”原点，但又不想完全放弃数据拟合的截距

注意：Include 和 Force 选项下，至少需要一个校准点即可生成曲线；Ignore 则至少需要两个。所以单点校准必须选 Include 或 Force。

2.3 Force（监管方法要求，或确认真实空白为零）

适用场景：

? 方法标准明文要求强制过原点

? 你的实验证明：空白进样在目标物保留时间处没有响应，或者响应可以忽略

风险最大。强制过原点后相关系数可能从 0.998 升到 0.999，看起来“更好了”，但样品的回收率可能下降。

注意：相关系数高不等于准确度高。

还有一个隐蔽的坑：如果你的曲线有正截距但选了 Force，因为曲线被强行拉平了，高浓度点会被低估，低浓度点会被高估。

2.4 Blank Offset（空白响应稳定且已知的场景）

适用场景：

? 你的方法存在明确的、可重复的空白响应

? 你希望把这份空白响应从所有校准点中扣除，而不是让它变成一个拟合参数

Blank Offset 先把空白响应值从每个校准级别中减去，然后用 Force Origin 的方式拟合斜率。

如果你不确定空白响应是否稳定，不要用 Blank Offset。一个不稳定的空白值被固定为截距，比让它自由拟合更危险。

三、实操案例分析？

为了让大家更清晰地理解这四种处理方式的区别，下面我以同一条标准曲线为例，分别按 Ignore、Include、Force、Blank Offset 进行处理，结果对比如下。



图1  Ignore 线形图

图2  Include 线形图



图3  Force 线形图



图4  Blank offset 线形图

四种计算方式的线性相关系数见表1。



由表1可知，Ignore的截距大于Include，由于空白基质无响应，Force 和Blank offset 的曲线方程一致。

由于Force 和Blank offset 的曲线方程一致。只计算Ignore、Include、Force三种计算方式的偏差，见表2。

表2  3种计算方式的偏差



由表2可知：采用Ignore方式时，2.8浓度点的偏差为-19.6%，已经踩在LLOQ允许的±20%边缘；采用Include方式时，该点偏差为-9.6%，明显改善；而采用Force方式时，偏差为+11.8%，反而偏高。

原因在于：Include把(0,0)作为一个额外的校准点纳入回归，相当于假设零浓度时响应为零，导致回归线被“拉”向原点，截距从27.85降到19.36，低浓度点的计算值随之升高，偏差减小。但如果实际空白响应并不为零，那么(0,0)这个点就是错误的，会给回归引入一个不真实的数据点。Force则更极端，直接把截距强制为0，低浓度点计算值进一步升高，偏差由负转正。

那么，到底该选哪种计算模式？关键要先测空白：

? 若空白峰面积 ≈ 20~30，说明Ignore得到的正截距是真实的，但低浓度点偏差较大，此时应通过加权回归来改善；

? 若空白峰面积 ≈ 0，说明数据本身不应有正截距，可能是低浓度点存在污染或误差，此时Include或Force才可能合理。

根据我们的实验结果，空白基质无干扰，Include 或 Force 的计算方式似乎更合理。但考虑到实际样品中基质往往不稳定，对真实值影响较大，最终我们选择了 Ignore 结合加权回归的方式，解决了曲线低浓度端偏差的问题。

四、实操建议（LC-MS/MS 方法验证）

验证时建议按这个顺序判断：

4.1 先看 Blank Offset

如果空白基质响应明显（比如 > 定量下限的 20%），优先用 Blank Offset，这是生物分析的标准操作。

4.2 再看 Ignore

如果空白很干净，用 Ignore 看算出的截距。如果截距的绝对值 小于最低校准点响应值的 10%~20%，说明截距不显著，Ignore 就很可靠。

4.3 最后考虑 Force或Include

只有当 Ignore 的截距导致低浓度点回算偏差超限，且确认基质无干扰时，才尝试 Force。Force 之后必须重新检查所有校准点的 %RE，如果线性或准确度变差，就不能用。

一句话总结：空白干净用 Ignore；空白有干扰用 Blank Offset；想消除低浓度负值且验证允许用 Force；Include 在多数现代液质方法中较少作为首选，除非你的验证方案特别要求包含零点。