先交代个背景。我们组做Treg诱导分化,阴选完的细胞要在体外养三五天,所以对分选后细胞的状态特别在意。之前总觉得养到第三天细胞状态不太稳,一直怀疑是不是分选这步出了问题,但也没找到具体原因。
正好手上两种阴选试剂都有,就干脆做了个对比,顺手把时间也记下来了。一边是英诺思生物的EasyIso小鼠CD4 T细胞阴选试剂盒,无柱阴选,货号SN4102;另一边是我们实验室一直在用的进口阴选试剂盒,品牌按惯例脱敏写BioL****,按说明书推荐流程操作。
**实验怎么做的**
取同一只小鼠的脾脏,做成细胞悬液,充分混匀之后一分为二。这一步是关键,同源样本能排掉个体差异,不然比出来也说不清是谁的原因。
两组同期做,都是我自己操作的,手法尽量保持一致。
英诺思这组是两步孵育,抗体10分钟加磁珠5分钟,然后磁极吸附一次,收上清就完事了,全程我自己掐表大概是18分钟。不需要分选柱,也没有离心洗涤这些步骤。
进口那组也是两步孵育,但抗体15分钟、磁珠15分钟,吸附完还要把细胞吹打重悬,再吸一次,全程坐下来超过30分钟。
检测上两组用的是同一批AOPI、同一台流式仪、同一套设门策略,一次上机读